[发明专利]一种检测维生素C中脱氢维生素C的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测维生素C中脱氢维生素C的方法，特别涉及一种利用HILIC亲合柱测定脱氢维生素C的方法。

背景技术

维生素C是细胞氧化-还原反应中的催化剂，人体自身不能合成，必须从食物中摄取；食品中加入维生素C兼有营养强化和防变质、保鲜等多重作用；其结构式为：

分子式为C₆H₈O₆,分子量为176.13

维生素C不稳定，极易被氧化分解，从而失去维生素C的功效。当在有氧条件下，维生素C被氧化为脱氢抗坏血酸(脱氢维生素C)，然后生成2,3-二氧代-L-古洛糖酸(2,3-Dike-to-L-gulonic acid)，进一步降解生成糠醛和羟基糠醛；脱氢抗坏血酸的生成标志着维生素C已失去了活性，所以测定脱氢抗坏血酸具有重要的意义，其结构式为：

分子式为C₆H₆O₆,分子量为174.11

目前没有关于维生素C中脱氢维生素C检测分析方法的专利文献，而在非专利文献中，张会轻等人研究了一种维生素C中降解产物脱氢VC的HPLC测定方法(医药化工，2011.6第34卷第6期)，该文献中公开了采用高效液相色谱法，用氨基柱(250×4.6mm)对VC及脱氢VC进行分离测定，流动相乙腈和三氟乙酸的比例为85：15，采用蒸发光检测器，柱温为100℃；最后检测脱氢VC和VC的保留时间分别为3.93min和4.45min，此文献中公开的脱氢VC的检测范围为0.5-1.5mg/ml，平均回收率为101.2％；文献抗坏血酸降解产物的色谱分析(袁军、华西药学杂志，2001.16(4)：305-306)中公开了采用光二极管阵列检测器、硅胶柱，以0.02mol/L的KH₂PO₄-乙腈(1:3)为流动相，流速0.5ml/min，测试VC和脱氢VC的混合液，VC和脱氢VC的混合液中两峰保留时间分别为7.35min和5.46min；同时本文献中公开了利用硅胶G板薄层板的方法测出的去氢抗坏血酸的最低检出限为0.8ug。

由于维生素C极易被氧化分解失去维生素C的功效，而以上检测方法中脱氢维生素C的最低检测限较高，灵敏度不高，并且方法的回收率数值超过了101％，另外氨基柱和硅胶柱的耐用性不高，蒸发光检测器普及性差、灵敏度低等问题，急需要一种灵敏度高、检测限低、回收率准确的分析方法来检测维生素C中脱氢维生素C的方法。

发明内容

本发明为解决以上问题提供一种简单、快速分离分析维生素C中的脱氢维生素C的高效液相色谱法，从而实现对维生素C的质量控制。

本发明的技术方案如下：

一种检测维生素C中脱氢维生素C的方法，该方法采用高效液相色谱仪测定，其色谱条件为：

色谱柱：HILIC亲合色谱柱；

流速：0.8-1.2ml/min；

柱温：30-40℃；

紫外检测器检测波长：220-230nm；

进样量：10-30μl；

流动相：A相：乙腈--异丙醇-水；

B相：乙腈-水；

流动相A、B按梯度程序进行。

上述HILIC亲合色谱柱规格为：250mm×4.6mm，5μm。

其中，流动相：A相中乙腈--异丙醇-水的体积比为：85～89：8～12：3；B相中乙腈-水的体积比为65～75：25～35；

流动相：A相乙腈--异丙醇-水的体积比优选为：86～87：9～11：3；B相乙腈-水的体积比优选为：68～73：28～32；

优选的进样温度为35℃；

优选的进样量为20μl。

进样梯度程序为：

该方法可用于检测注射用复方维生素(3)及复方维生素(13)注射液中脱氢维生素C的含量，以便用于研究注射剂的稳定性、降解性等性能。

本发明的有益效果：

1)通过采用紫外检测器及HILIC亲合色谱柱的技术，解决了蒸发光检测器灵敏度低、普及性差，以及氨基柱、硅胶柱等耐用性差的问题，得到了灵敏度高、重复性好、可以准确定量检测维生素C中脱氢维生素C的分析方法；

2)经过检测，本发明的定量限为0.38μg/ml，检测限为0.11μg/ml；表明该法检测灵敏度较高，满足VC中微量脱氢VC的定性和定量检测；