[发明专利]检测细菌性阴道病的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种检测细菌性阴道病的试剂盒。

背景技术

细菌性阴道病(bacterial vaginosis，BV)是由于阴道内微生态平衡失调，正常乳酸杆菌减少而阴道加特纳菌(Gardnerella vaginalis,GV)、普雷沃菌(Prevotellaspp)、拟杆菌(Bacteroides)、动弯杆菌(Mobiluncus spp)人型支原体(Mycoplasmahominis)等兼性厌氧菌数量异常增加，所引起的一种无阴道粘膜炎症表现的综合症。以前对它的认识有限，曾命名为嗜血杆菌阴道炎(Haemophilus vaginitis)、棒状杆菌阴道炎(Gardnerella vaginalis vaginitis)、非特异性阴道炎(NO-specific vaginitis)和加特纳菌阴道炎(Gardnerella vaginits)等，皆因在不同时期对其病原体认识不同而命名不同。1955年Gardner和Dukes从特异性阴道炎患者的阴道分泌物中分离出阴道嗜血杆菌，认为是本病的病原菌，因而称此病为阴道嗜血杆菌阴道炎(Corynebacterium vaginitis)。1980年Greenwood和Pickett通过DNA-DNA杂交试验，电镜观察及细菌外膜生化分析证实此菌是一独立新菌种，并命名为阴道加特纳菌(GV)，改称此病为加特纳菌阴道炎。但由于GV并不是导致该病的唯一病原体，还有其他厌氧菌和支原体等存在，特别是此病的炎性表现并不明显，分泌物中白细胞稀少，也无脓细胞存在，因此，在1984年的瑞典国际会议上被正式命名为“细菌性阴道病”。BV患者约10％～50％无临床症状，主要依靠实验室诊断。BV的诊断方法大致分为三类即临床诊断、微生物学诊断、生物化学诊断。临床诊断即传统的Amsel法，是传统诊断BV的金标准，简单易行，但易受人为因素及BV感染无头的因素影响，主观性强，操作费时，已逐渐被其他方法所取代。微生物学检查操作繁琐，效率低，已很少使用。随着对BV病原学研究的深入，发现BV与阴道微生物中的某些代谢产物有关，因此可以通过检测这些微生物的代谢产物来诊断BV，目前主要通过检测与BV相关的酶来诊断BV，如唾液酸苷酶。

唾液酸酶又称神经氨酸酶，是一种存在于溶酶体、细胞质和细胞膜上的酶蛋白，该酶活性与毒力因子很相似，能够水解非还原性的终端为唾液酸的多种底物，如糖蛋白、糖脂类、神经节苷脂以及多聚糖类，破坏粘蛋白，增强细菌黏附性，而且通过损害IgA的免疫反应性来对抗其他毒力因子。唾液酸苷酶由阴道菌群中的厌氧菌如普雷沃菌和拟杆菌等产生，其活性被认为与BV感染水平呈正相关。唾液酸苷酶的活性在BV时(1.35±1.87nmol/ml min)明显高于无BV的妇女(0.03±0.14nmol/ml min)该法的检测原理是，人工合成唾液酸酶底物，并以其酶与底物反应后显示颜色的不同来诊断BV。

近年来利用致病菌特异的酶催化机理，结合发色底物形成的酶快速检测技术，已成为BV快速诊断发展的主导方向。如BV BLUE试剂盒，以其简便、快速、准确的优点在欧美许多国家广泛应用。为了对阴道内环境做进一点的了解，目前国外大多将唾液酸苷酶、过氧化氢、白细胞酯酶、pH值等几项进行联合检测。

过氧化氢是阴道内乳酸杆菌产生的一种重要的杀菌物质，对防止致病菌的加剧增值和维持阴道微生态平衡具有重要的作用，一般情况下，阴道分泌物中过氧化氢浓度与乳酸杆菌的数量成正比，过氧化氢浓度的测定是分析阴道微生态是否正常的良好指标。正常人阴道分泌物中的过氧化氢浓度一般在2，如检测过氧化氢浓度≤2时，则意味着阴道内微生态菌遭到到破坏，已经引起了厌氧菌的生长，导致了阴道内菌群的失衡。