[发明专利]一种云实三环二萜及其制法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种云实三环二萜及其制法和用途，具体指3β,7β-二羟基-4α-羟甲基-12(13),15(16)-双键-卡山烷二萜及其制法和用途。

背景技术

云实(Caesalpinia decapetala (Roth) Alston)又名“药王子”，“牛王刺”，“朝天子”，“倒挂刺”等，为豆科(Fabaceae)云实属植物，生于我国南部地区，平原地带长载培，常野生于山坡、岩旁、林边、河边或灌木丛中。云实的果、茎皮含单宁，种子可榨油，根茎及果实供药用，具有清热除湿杀虫之功效，治疗痢疾、疟疾、消渴、小儿疳积等疾病。

因此，开发和利用云实中具有生物活性的单体化合物，进一步挖掘其潜在的药用价值，并对其单体化合物的结构和理化性质进行确定和表征，对于开发利用云实资源具有重要意义。

发明内容

本发明就是克服现有技术的不足，提供一种从云实种子中分离得到的具有重要生物活性和产业化利用价值的云实三环二萜单体化合物。该单体化合物为云实种子中首次分离得到，利用现代分析手段表征其结构并确认其生物活性后，根据有关化合物的命名规则命名为3β,7β-二羟基-4α-羟甲基-12(13),15(16)-双键-卡山烷二萜。

一种从云实种子中分离得到的3β,7β-二羟基-4α-羟甲基-12(13),15(16)-双键-卡山烷二萜，具有如下式所示结构：

上述从云实种子中分离得到的3β,7β-二羟基-4α-羟甲基-12(13),15(16)-双键-卡山烷二萜按下述方法得到：

云实种子干燥后粉碎过筛，加乙醇加热回流提取3次，每次1-3小时，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩后得总浸膏，总浸膏经100～200目硅胶拌样，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇洗脱，洗脱液减压浓缩至干；取氯仿层浸膏用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇(1:0-0:1)9梯度洗脱，得到9个馏分 Fr A-I，FrH部分经凝胶色谱洗脱后再用氯仿-甲醇作为洗脱液洗脱除去色素，然后样品经反相中压色谱柱经甲醇-水 (30:70; 50:50; 60:40; 70:30; 80:20; 90:10)梯度洗脱，得到六个部份FrH1-6，其中FrH3经高效液相色谱纯化分离，采用甲醇-水洗脱，收集28.5分钟的洗脱液结晶即得。

所述加热回流提取中云实种子与乙醇的质量体积比为1:8-1:12。

所述氯仿-甲醇洗脱液中氯仿与甲醇的体积比为40:60-55:45。

所述甲醇-水洗脱液中甲醇与水的体积比为68:32。

3β,7β-二羟基-4α-羟甲基-12(13),15(16)-双键-卡山烷二萜为无色粉末，易溶于氯仿，甲醇，将3β,7β-二羟基-4α-羟甲基-12(13),15(16)-双键-卡山烷二萜进行体外抗肿瘤药效学实验，体外抗肿瘤药效学实验利用MTT比色法。

以3β,7β-二羟基-4α-羟甲基-12(13),15(16)-双键-卡山烷二萜为实验组，以Doxorubicin（多柔比星，抗肿瘤药物）为对照组，同时设立空白组，实验组、对照组和空白组选取HeLa（人宫颈癌）细胞和HT-29(人结肠癌)细胞为实验对象，培养基稀释后，以6×104/ml的密度接种于96孔板，每孔100μl，培养箱中正常培养24小时后，各组加入相对应的药物，使各组药物的最终浓度分别为2.5 μg/ml (1组)，5 μg/ml (2组)，10 μg/ml (3组)，20 μg/ml (四组)，40 μg/ml (5组)，共设5个浓度，每个浓度3个复孔；培养48小时后，于每孔加MTT 10 μl染色；继续培养四小时后，吸弃原培养液，每孔加入DMSO 100μl，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解，并于酶联免疫检测仪 570 nm 波长处检测光密度值，根据光密度值计算50%抑制浓度（IC₅₀ ，μg/mL)，光密度值计算IC₅₀的计算方法为现有公知技术。实验组、对照组对HeLa细胞和HT-29细胞的IC₅₀如表1所示。

表1