[发明专利]一种通用型检测氟喹诺酮类药物的免疫金标卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种通用型检测氟喹诺酮类药物的免疫金标卡及其制备方法。

背景技术

氟喹诺酮类药物作为人工合成抗生素类药物，以抗菌能力强、机体利用率高、与其它种类抗生素对细菌无交叉耐药性等优点广泛应用于医学(作为一线抗菌类药物应用于临床)、农副水产品(作为畜禽水产动物的重要抗菌药用于预防治疗传染性疾病)生产中，当前氟喹诺酮类抗菌药在食品样本中呈多组分混合高残留趋势，更为忧虑的是，相关制药企业、医院和农副水产品生产企业中上述抗生素在环境中扩散造成土壤和地表水源呈极微量残留对人类健康够成巨大潜在威胁，因此对氟喹诺酮药物残留检测不仅有待测样本面多量广的需求(要求对待测样本高通量快速定性筛查)，同时有快速检测定性为阳性样本精确定量分析需求，更有ppt级极微量残留待测样本经高倍富集后的精确定量测定需求。综合各领域氟喹诺酮类药物使用情况目前需检测残留主要对象以恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、双氟沙星(达氟沙星)等为主。

依据目前多种氟喹诺酮类药物残留检测技术特点与应用范围，免疫检测方法已成为氟喹诺酮类药物残留高通量快速定性筛查或半定量分析不可替代的技术手段。目前对氟喹诺酮药物残留快速筛查主要采用间接竞争ELISA和免疫金标卡二种检测模式，二种模式中尽管免疫金标卡灵敏度略低于间接竞争ELISA试验灵敏度(现有文献表明金标卡检测限(T线完全消失)约为间接竞争ELISA的IC₅₀值5-10倍)，但免疫金标卡以便于保存、试验时间短(5-10min可判读结果)、试验结果直观(可用肉眼直接观察，无需借助任何仪器设备分析)等优点倍受基层检测用户亲睐，占氟喹诺酮药物快检市场大部分份额。

目前商业化氟喹诺酮药物快检免疫金标卡存在二大缺陷：

1、检测限偏低:商品化免疫金标卡氟喹诺酮药物单组分检测限(T线完全消失)约为10ppb，而农业部对上述8种药物最低残留标准为：30-100ppb，以该标准用5-10×缓冲液制备待测样本匀浆上清，不对目标物富集前提下，其含量极有可能已低于该检测限，无法对待测样本进行有效定性筛查，改用小于5×缓冲液制备待测样本匀浆上清不仅不利于待测样本中目标物充分释放影响检测准确性出现假阴性导致漏检，同时也极有可能因样本基质含量过高干扰抗体对目标物识别影响检测特异性出现假阳性导致错检，因而免疫金标卡单组分检测限应小于等于3ppb才能充分满足用户实际需求；

2、通用性不强:赵银丽等在文献中报道利用自主制备恩诺沙星强特异性单克隆抗体作标记抗体研制免疫金标卡检测限(T线完全消失)小于等于3ppb，并以鸡肌肉作模式基质恩诺沙星外标掺入回收试验获得了良好结果，但因与其他喹诺酮药物无交叉反应，仅能作恩诺沙星单组分残留强特异性分析，更为不利的是恩诺沙星经体内代谢部分转化为环丙沙星，利用该卡无法界定恩诺沙星给药后体内恩诺沙星和环丙沙星混合残留是否超标，其他氟喹诺酮类药物如诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星等目标物的免疫检测产品亦有一些零星报道，但多以对其目标物强特异性等特点适用于单组分测定。而食品样本中氟喹诺酮药物的残留呈多组分混合残留趋势，因而无法用单一抗体免疫检测产品对多组分残留同时作定性或半定量分析。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种通用型检测氟喹诺酮类药物的免疫金标卡及其制备方法，使得所述免疫金标卡具有较高的灵敏度，对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、依诺沙星等单组分标样检测限(T线完全消失)小于等于3ppb,对氧氟沙星检测限小于等于20ppb，对洛美沙星、沙拉沙星检测限小于等于100ppb。

本发明的另一个目的在于提供一种通用型检测氟喹诺酮类药物的免疫金标卡及其制备方法，使得所述免疫金标卡能够同时检测恩诺沙 星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星、氧氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星等。

本发明的另一个目的在于提供一种通用型检测氟喹诺酮类药物的免疫金标卡及其制备方法，使得所述免疫金标卡具有较高的稳定性。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种通用型检测氟喹诺酮类药物的免疫金标卡，包括胶体金垫和层析膜，所述胶体金垫搭接在层析膜上靠近检测线的一端；