[发明专利]一种以非编码lnc‑CXCL1及编码基因cxcl1组合为检测或诊断筛查标志物的重症肌无力检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及以非编码lnc-CXCL1及编码基因cxcl1组合为检测或诊断筛查标志物的重症肌无力检测试剂盒及应用。

背景技术

重症肌无力(myasthenia gravis，MG)是神经肌肉接头相关疾病中最常见的自身免疫性疾病，典型的临床表现为波动性的全身骨骼肌易疲劳和无力，包括呼吸肌的受累。其在世界范围内的患病率约40-180/100万，年发病率约为4-12/100万，近年来随着检测技术的提高，新的抗体的不断被发现，MG的发病率呈上升趋势，尤其是晚发型MG。根据受累部位的不同、发病年龄的不同和血清抗体类型的不同，可将MG分为不同的亚型。尽管大多数MG的预后较好，但几乎所有的MG需要长时间的药物治疗，据统计仍有10-15％的患者不能用药物完全控制疾病进展或者以承受免疫抑制剂严重的副作用为代价，极大的影响了患者的生活质量，加重了家庭与社会的负担。因此对MG发病机制的研究和特异性治疗药物的开发正日益引起科研、临床工作者的重视。

非编码RNA(Non-coding RNA，ncRNA)是指在基因转录后不能继续进行翻译的RNA分子，其中具有调控作用的称为调控非编码RNA，调控非编码RNA根据其片段的长度可粗略分为短链非编码RNA(miRNA、siRNA和piRNA等)和长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)。LncRNAs是长度大于200bp的长链RNA分子。全基因组水平非编码基因序列的研究发现，在人类基因组中大约有10,000～200,000种不同类型lncRNAs被转录。LncRNA的来源不一，可以为编码基因结构的中断、ncRNAs复制过程中的反向移位、染色质的重排、编码基因开放阅读框的突变以及转位子插入到编码基因的片段等等。近年来的研究表明，lncRNAs具有广泛的生物学功能，可通过以下机制参与细胞凋亡、分化、发育等多种重要的调控过程：1.募集染色体重塑复合体到特定的基因位点来标记基因沉默区域；2募集转录因子来促进或抑制基因表达.；3.转录基因的反义链lncRNA可调控转录基因相应mRNAs的剪接或引导其降解。LncRNAs在免疫系统中也有着不可忽视的作用，它参与了免疫细胞的活化和分化。LncRNA可以调控CD8⁺T细胞和CD4⁺T细胞的激活与分化，并且随着T细胞的分化而呈现出动态的变化，对T细胞的发育凋亡起关键作用。Bolland et al.的一项研究报道，一些lncRNA在染色质重塑过程中可以影响TCR或Ig的V/D/J的重排。随后的研究发现，在IgH可变区的lncRNA可影响前体B细胞在该位点的空间结构，从而影响B细胞分化。LncRNA也可以调控树突状细胞(dendritic cell，DC)分化。最近一项新的研究发现人lnc-DC特定表达于单核细胞源性DC的细胞浆中，通过与DC分化相关的转录因子STAT3的羧基端直接接合，从而调控DC的分化，对DC的功能也起着关键的作用。反义lncRNA还可以参与炎症反应调控固有免疫应答，其可能的机制为炎症刺激时促使很多lncRNAs的异常表达，尤其是巨噬细胞分布丰富的组织，异常表达的lncRNAs通过与核不均-核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)结合调控免疫炎症相关的编码基因的表达，或者位于编码基因上游，作为反义链反向调控编码基因的表达，最终促使单核细胞分化为巨噬细胞及树突状细胞而发挥调节作用。

编码基因cxcl1是CXCR2⁺家族细胞的趋化因子，如中性粒细胞；非编码Lnc-CXCL1是编码cxcl1的不表达的不同转录本，其表达和生物学功能还未见报道。因此本实验中我们采用荧光定量PCR同时检测了非编码Lnc-CXCL1和编码基因cxcl1在MG患者和正常对照组中的表达，发现非编码Lnc-CXCL1和编码基因cxcl1的ΔC_T表达上升，即相对表达下降，根据这个结果，研制一种以非编码lnc-CXCl1及编码基因cxcl1为检测或诊断筛查标志物的重症肌无力检测试剂盒。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种以非编码Lnc-CXCL1及编码基因cxcl1组合为检测或诊断筛查标志物的重症肌无力检测试剂盒。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述以非编码lnc-CXCL1及编码基因cxcl1组合为检测或诊断筛查标志物的重症肌无力检测试剂盒包括如下引物对：