[发明专利]小鼠急性放射性十二指肠炎模型的建立方法

说明书

本发明属于放射医学技术领域，具体涉及一种小鼠急性放射性十二指肠炎模型的建立方法。该方法通过给予小鼠8Gy的γ射线照射，照射部位为腹部，于照射后2周，对小鼠进行十二指肠病理分析及对凋亡相关因子BCL‑2与炎性相关因子TGF‑β1的蛋白表达水平进行检测。本发明采用更接近临床放疗的照射方式建立放射性十二指肠炎模型，为临床放射性肠损伤的防治研究提供了实验基础。

技术领域

本发明属于放射医学技术领域，具体涉及一种小鼠急性放射性十二指肠炎模型的建立方法。

背景技术

人类疾病的动物模型是具有人类疾病模拟性表现的动物实验对象，使用动物模型是现代生物医学科学研究中的一个非常重要的实验手段，有助于更方便、有效的认识人类疾病发生、发展的规律，从而为防治措施的研究提供实验基础。

放射性肠炎(RE)是盆腹腔恶性肿瘤接受放射治疗引起的常见肠道并发症，目前仍无有效的临床治疗手段。宫颈癌是发生在全世界妇女中仅次于乳腺癌的第二个常见肿瘤，位居发展中国家女性恶性肿瘤之首，严重威胁着女性的生命安全。放射治疗为宫颈癌治疗的常用手段。然而，据报道，70％的盆腔放疗患者肠道出现炎症症状，严重影响了患者的生活质量。其较严重的近、远期放射性不良反应严重限制了临床疗效的发挥。放射性肠炎一旦发生，治疗比较棘手。目前对放射性肠损伤仍无有效的临床治疗手段，而成为医学界的难题。因此对放射性肠炎防治的研究具有重要的临床和理论价值。

电离辐射可以引起生物体免疫系统功能失调，细胞因子分泌紊乱，促进细胞凋亡等。BCL-2是重要的凋亡抑制因子，它能抑制射线、化疗药物以及其他一些因子等多种凋亡诱导因素介导的细胞凋亡，具有很强的抗细胞凋亡作用。因此，BCL-2的表达水平能够在一定程度上反映细胞的凋亡情况。辅助性T(Thelper，Th)细胞在生物体内具有重要的作用，可以诱导其他免疫细胞转变为效应细胞。Th细胞至少有两个亚群，Th1细胞和Th2细胞亚群。它们可分泌不同的细胞因子，Th1细胞的代表性细胞因子是IL-12和TGF-β等，能够调节细胞免疫反应。TGF-β是一种强有力的促成纤维细胞分裂因子，可促进成纤维细胞的分裂增殖及其成熟分化，促进胶原蛋白、粘蛋白等细胞外基质的基因转录及蛋白合成，同时通过抑制蛋白酶的合成来阻止基质蛋白的降解。在电离辐射效应中TGF-β的主要作用表现为对细胞外基质代谢的影响，临床上则表现为促进器官或组织的纤维化。已有研究证实电离辐射可以引起小鼠血清中TGF-β表达水平的上调。

发明内容

本发明的目的在于提供一种建立小鼠急性放射性十二指肠炎模型的方法，用于临床放疗诱发的十二指肠炎的预防和治疗的研究。

本发明的技术方案如下：一种小鼠急性放射性十二指肠炎模型的建立方法，包括如下步骤：

(1)对小鼠进行检疫，一周后采用随机数字表将小鼠随机分组，分为对照组和剂量组；

(2)将对照组、剂量组两组小鼠进行麻醉，对剂量组小鼠进行全腹部照射，单次吸收剂量为8Gy；对照组小鼠不照射；

(3)照射后继续饲养两周，对全部小鼠进行剖杀，取十二指肠；

(4)将十二指肠组织用生理盐水清洗后，用40g/L甲醛溶液固定，将固定好的1cm十二指肠乙醇脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，镜下观察病理形态学变化；

(5)将十二指肠组织称重，按比例用1×PBS进行稀释，通过组织匀浆器进行碾磨制备匀浆，12000rpm离心10min，收集上清液；进行ELISA分析，每组设3个平行样，在酶标仪上450nm处检测OD值，根据标准品绘制标准曲线，并得出公式，求出所测样本中BCL-2、TGF-β1的相应浓度。

进一步，如上所述的小鼠急性放射性十二指肠炎模型的建立方法，步骤(1)中，对照组小鼠10只，剂量组小鼠14只，雌雄各半。