[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的荧光免疫层析试纸

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫层析试纸，特别是涉及一种检测黄曲霉毒素B₁的荧光免疫层析试纸。

背景技术

黄曲霉毒素B₁(Aflatoxin B₁，称AFB₁)是由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)和特曲霉(Aspergillus nomius)产生的真菌次级代谢产物。AFB₁常天然存在于花生、棉籽、玉米、小麦和稻米等农作物中，检出率高，具有强烈的毒性和致癌性，属于I类致癌物。我国AFB₁对粮食和饲料的危害有不少报道，检出率高达80％～100％，可抑制动物免疫机能，降低动物生产性能，引起动物继发感染，甚至死亡，同时还可在动物产品中残留而威胁人类健康。因此针对AFB₁开展有效的快速检测很有意义。我国国家标准GB 13078规定，在玉米、花生饼(粕)、棉籽饼(粕)、豆粕中AFB₁最高残留限量≤50μg/kg，在畜禽类饲料中AFB₁最高残留限量≤20μg/kg。目前，用于AFB₁的检测方法主要有生物鉴定法、化学分析法、仪器分析法和免疫分析法4大类。生物鉴定法的优点是待检样品不需很纯，缺点是灵敏度低、实验周期较长。化学分析法的优点是经济实用，但不能准确定量，且分析结果的可重复性和再现性差。仪器分析法具有高分离、高检测效能及快速分析能力等优势，但对样品的前处理要求高，对操作人员技术要求高，且仪器设备价格昂贵，不适于快速检测。免疫分析法操作简单，成本低，而且具有较好的准确性和灵敏性，同时能进行定性和半定量或一定定量的检测，适合于对大量样品的筛查，是目前优先发展的检测技术。

未修饰的氧化石墨烯表现出很弱的荧光，在紫外光照射下用肉眼基本上观察不到荧光。这是由于氧化石墨烯纳米片表面有很多含氧基团，例如纳米片表面上的环氧键和羟基，纳米片侧面的羧基，这些基团通常能诱导电子-空穴对的非辐射复合，从而导致氧化石墨烯的荧光很弱。经过正丁胺修饰以后，氧化石墨烯纳米片表面的环氧键和羧基都被反应掉，这将极大地降低其非辐射复合能力。因此修饰后，氧化石墨烯表现出很强的荧光可作为新型标记物在生物检测领域应用。虽然胶体金试纸在此方面应用较广，但其不能做到定量检测，作为更敏感、稳定、灵活、安全的氧化石墨烯荧光层析试纸的研究，是胶体金免疫检测技术的有力补充。

上转换荧光纳米颗粒经过表面修饰与活化后，作为新型标记物在生物检测等领域进行应用。因其独特的物理结构和光学特性，使上转换荧光免疫试纸法与理化检测与微生物检测技 术相比，具有灵敏度高，操作过程简单，成本低及能进行大批量现场检测的特点；与胶体金试纸相比，具备定量检测的特色，作为更敏感、稳定、灵活、安全的UPT-LF的研究，是胶体金免疫检测技术的有力补充。但是目前上转换荧光材料的制备和试纸的研究仍存在发光效率不够，荧光材料种类少等缺陷，丞待加强该方面的研究和探讨。

下转换荧光纳米颗粒具有高灵敏度，是一种完全惰性的无机发光材料，具有独特物理结构和光学特性，可作为新型标记物应用在生物检测领域。将其与生物学、免疫学、材料学相结合而开发的用于AFB₁快速检测的下转换荧光纳米颗粒标记免疫层析方法，在灵敏、稳定、灵活方面显示了优异的特性，是胶体金免疫检测技术的有利补充。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测黄曲霉毒素B₁的荧光免疫层析试纸，该试纸具有特异、灵敏、快速、简便等特点，能定量检测食品、饲料、中草药、尿液中的黄曲霉毒素B₁。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种检测黄曲霉毒素B₁的荧光免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为吸附纤维层、荧光抗体纤维层、纤维素膜层及吸水材料层，所述的纤维素膜层上设有用偶联AFB₁的载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹和用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹；所述的荧光抗体纤维层采用吸附荧光抗体的玻璃纤维棉制成，荧光抗体为氧化石墨烯荧光纳米材料、NaYF₄:Yb,Tm纳米颗粒或NaGd(WO₄)₂：Eu³⁺纳米颗粒标记的AFB₁单克隆抗体或者多克隆抗体。