[发明专利]递送VEGF-siRNA的纳米金刚石,其制备,活性和应用

说明书

本发明公开了递送VEGF‑siRNA的递送体系VEGF‑siRNA/ND‑CONHCH₂CH₂NH‑SDGR，公开了它的制备方法，公开了它的纳米结构，公开了它转染VEGF‑siRNA的效率，公开了它沉默VEGF基因的作用，公开了它下调VEGF蛋白表达的作用，公开了它抑制瘤细胞增殖的作用，进一步公开了它抑制S180小鼠肿瘤生长的作用，因而公开了它在制备肿瘤基因治疗药物中的应用。

技术领域

本发明涉及递送VEGF-siRNA的体系VEGF-siRNA/ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR，涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它转染VEGF-siRNA的效率，涉及它沉默VE GF基因的作用，涉及它下调VEGF蛋白表达的作用，涉及它抑制瘤细胞增殖的作用，进一步涉及它抑制S180小鼠肿瘤生长的作用，因而涉及它在制备肿瘤基因治疗药物中的应用。属于生物医药学领域。

背景技术

肿瘤生长与转移依赖于新生血管提供营养以及排泄代谢产物，VEGF作为内皮细胞的有丝分裂原和促血管生成因子影响肿瘤的血管生成的整个过程。下调血管内皮生长因子表达，是抑制肿瘤生长的有效手段。安全有效地将VEGF基因载入肿瘤细胞，取决于载体。纳米金刚石是碳元素组成的非病毒性载体。粒径小、比表面积大、化学稳定、安全和生物相容是的纳米金刚石的基本特点。

RNA干扰是极具潜力的肿瘤治疗途径之一。siRNA一旦进入肿瘤细胞就能抑制目的基因表达，从而抑制肿瘤细胞生长。由于siRNA易被体内核酸酶降解、半衰期短、转染效率低，所以发明siRNA的靶向载体，具有临床应用的重要性。RGD四肽与肿瘤细胞表面整合素αγβ3的受体可特异性结合，具有肿瘤靶向性。发明人曾经公开VEGF-siRNA/ND-CORGDS是VEGF-siRNA的递送体系。可是2mgVEGF-siRNA/ND-CORGDS只能包载0.1μg VEGF-siRNA。载VEGF-siRNA的容量小。此外，VEGF-siRNA/ND-CORGDS向肿瘤细胞转染VEGF-siRNA的时间为6小时。转染时间长。为了提高RGD四肽修饰的纳米金刚石包载VEGF-siRNA的容量并缩短RGD四肽修饰的纳米金刚石向肿瘤细胞转染VEGF-siRNA的时间，发明人经过艰苦的研究。最终发明人发现，将纳米金刚石表面的酰氯基与乙二胺的一个氨基酰胺化，RGDS与乙二胺的另一个氨基酰胺化，制得的ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR再包载VEGF-siRNA。

1mgVEGF-siRNA/ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR中可包载17.8μg VEGF-siRNA。包载容量提高了35.6倍。VEGF-siRNA/ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR转染VEGF-siRNA的时间为4小时。转染时间缩短了2小时。这是意想不到的技术效果。根据这个发现，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供VEGF-siRNA的递送体系VEGF-siRNA/ND-CONHCH₂-CH₂NH-SDGR。

本发明的第二个内容是提供VEGF-siRNA/ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR的制备方法。

本发明的第三个内容是提供VEGF-siRNA/ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR的纳米结构。

本发明的第四个内容是评价VEGF-siRNA/ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR转染VEGF-siRNA的效率。

本发明的第五个内容是评价VEGF-siRNA/ND-CONHCH₂CH₂NH-SDGR沉默VEGF基因的作用。