[发明专利]一种苜蓿多糖的提取和纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于农业领域，涉及一种苜蓿多糖的提取和纯化方法。

背景技术

据2013年6月份出版的中国畜禽养殖中抗生素使用情况调查报告显示，养殖业是当前抗生素使用量最大的领域。国内抗生素总产量为21万吨，国内消费量约18万吨，其中，用于畜牧及其饲料行业的抗生素高达9.7万吨，约占54％。抗生素的大量使用造成动物耐药性增强，畜禽机体抗病力减弱；抗生素的长期使用更使得机体肠道菌群失调，破坏微生态环境；同时畜产品中药物的残留成为突出问题。1986年，瑞典成为第一个全面禁止使用抗生素的国家，1999年开始，欧盟禁止在饲料中添加部分抗生素，2006年开始欧盟全面禁止抗生素的使用。因此寻求抗生素替代物是当前畜牧业迫切需要解决的问题。

近年来，植物多糖的药用保健功能逐渐引起人们的关注。植物多糖具有自身特有的优点：其来源广泛、种类繁多；生物学功能突出；无毒副作；无残留；无抗药性。同时植物多糖所具有的多种生物学功能，已被广泛应用于畜禽生产，并被证明有着显著的改善胴体品质，促生长的作用；提高抗原免疫应答，激活免疫细胞的作用；以及广泛的抗病毒和抗应激作用。植物性多糖作为植物源性添加剂，替代抗生素，更是开发无抗日粮的备选项，对将来畜产品的安全生产提供了安全优质保障。

水溶性多糖是多糖中活性较大的组分，人们对它的研究最多。一般水溶性多糖易溶于热水，冷却后成粘稠沉淀析出。通常用水提取乙醇沉淀的方法得到粗多糖。杨丽娥等(2002)采用水提取乙醇沉淀的方法对苜蓿多糖提取、纯化条件进行优化研究，初步确立了较为合理的提取工艺。其研究结果显示，提取苜蓿多糖的最佳条件为100℃水浴浸提2h，固液比为1:20，醇析浓度为80％，粗多糖脱蛋白时，V氯仿与V正丁醇之比为4:1，经脱蛋白处理后多糖浸出率可达7.84％。张东杰等也对苜蓿多糖提取过程中各环节的最佳条件进行了一定的探讨，其试验结果与杨丽娥得到的最佳条件存在着一定的差异，温度100℃提取时间为1h，浸提时固液比为1:40，醇析浓度为95％，粗多糖脱蛋白时，v氯仿与v正丁醇之比为5:1，多糖浸出率可达6.8％。

苜蓿堪称“牧草之王”，是世界上栽培面积最广泛、最重要的豆科牧草之一。我国种植面积为183万hm²，居世界第5位，以其草质优良、营养丰富在畜牧业上发挥着重要的作用。同时，据中药记载，苜蓿具有清热解毒、凉血通淋之功效，能降血脂、利尿、抑菌、抗肿瘤。长期服用利五脏、轻身健人。基于多糖的药用保健功能，推测苜蓿多糖可能是其发挥功能的活性成分之一。

大量试验证明，苜蓿具有免疫调节，降血糖、降血脂、抗炎、抗疲劳、抗衰老等功效。中国农业科学院畜牧兽医研究所自1996年开始，针对紫花苜蓿中有利于动物健康的有效活性成分进行了深入研究，成功研发出苜草素(主要活性成分——苜蓿多糖、黄酮、皂苷)。

水溶性苜蓿多糖是从紫花苜蓿中提取的植物多糖。研究表明，水溶性苜蓿多糖具有体外协同PHA、ConA、LPS、PWM诱导淋巴细胞增殖的作用。水溶性苜蓿多糖是多糖中活性较大的组分，人们对它的研究也最多。水溶性多糖分子量一般在2～6万道尔顿，易溶于热水，冷却后成粘稠沉淀析出，。通常用水煮醇提的方法得到粗多糖。

发明内容

本发明的目的是提供一种苜蓿多糖的提取和纯化方法。

本发明提供的提取和纯化苜蓿多糖的方法，包括如下步骤：

1)将苜蓿碎段用水浸提两次，合并两次所得的滤液，浓缩后醇析，收集析出物后离心或过筛，收集沉淀，再加水溶解所述沉淀，得到粗苜蓿多糖溶液；

2)将步骤1)所得粗苜蓿多糖溶液依次进行透析和脱蛋白处理，将脱蛋白所得体系沉淀后离心或过筛，收集上清液，醇析后，收集沉淀，干燥，得到所述苜蓿多糖。

上述方法的流程如图1所示。所述步骤1)中，所述苜蓿碎段的长度为2-3cm；

所述用水浸提步骤中，苜蓿碎段与水的用量比为1g：10-20g；

所述用水浸提包括如下步骤：将所述苜蓿碎段与水混合后煮沸，过滤，收集所得滤液，记为滤液I；再向所得滤渣中加水，煮沸，收集所得滤液，记为滤液II；最后合并所述滤液I和滤液II；

所述煮沸步骤中，时间均为0.5h-1h；

所述加水步骤中，水的用量为由滤液I和滤渣组成的体系的体积的1倍；

所述步骤1)浓缩步骤中，浓缩的程度为将所述滤液浓缩至原体积的1/4至1/10；

所述醇析步骤中，所用醇析剂为乙醇，具体为无水乙醇或乙醇的质量百分含量为95％的工业乙醇；