[发明专利]一种产红景天苷及其类似物的重组菌及构建方法及用途

权利要求书

1.一种产红景天苷及其类似物的重组菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：

(1)人工全合成酮基脱羧酶基因synkdc，所述酮基脱羧酶基因synkdc如SEQ ID No.03所示；人工全合成糖基转移酶基因synyjic，所述糖基转移酶基因synyjic如SEQ ID No.04所示；

(2)将synkdc基因通过酶切，连接到表达载体pRSFDuet-1的第一个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体为pSynkdc1；

(3)将synyjic基因连接到pSynkdc1的第二个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc1-yjic；

(4)从大肠杆菌BL21(DE3)菌中克隆得到T7 RNA聚合酶基因，连接到载体pYSC1上，筛选阳性克隆得到重组载体为pYBH1，所述pYSC1载体序列如SEQ ID No.05所示；

(5)按下述三种方式之一种进行：

方式一：

①从大肠杆菌BL21(DE3)菌中克隆得到T7 RNA聚合酶基因，通过λRed同源重组技术整合到SyBE-002447底盘菌株染色体上得到SyBE-002447(DE3)菌株；

②将重组载体pSynkdc1-yjic转化到大肠杆菌SyBE-002447(DE3)中，得到SyBE-218011菌株；

方式二：

①将重组载体pYBH1转化到大肠杆菌SyBE-002447中，得到SyBE-218012菌株；

②将重组载体pSynkdc1-yjic转化到大肠杆菌SyBE-218012中，得到SyBE-218013菌株；

方式三：

①将synkdc基因，通过λRed同源重组技术整合到大肠杆菌SyBE-002447(DE3)中，同时敲除基因feaB，得到SyBE-218014菌株；

②将synyjic基因，通过λRed同源重组技术整合到大肠杆菌SyBE-218014菌株中，同时敲除基因ushA，得到SyBE-218015菌株；

红景天苷类似物为苯乙醇-β-D-吡喃葡萄糖苷。

2.权利要求1之一的方法构建的产红景天苷及其类似物的重组菌SyBE-218011菌株、SyBE-218013菌株或SyBE-218015菌株。

3.产红景天苷及其类似物的重组菌制备红景天苷及其类似物的方法，其特征是包括如下步骤：

将权利要求2的重组菌SyBE-218011、SyBE-218013或SyBE-218015接种在LB培养基中，37℃，220rpm，震荡培养2-4h，在OD₆₀₀到达0.8-1.0之间时，然后转接到含有葡萄糖的M9培养基或红景天苷植物原料酶水解的培养基中，进行发酵，当葡萄糖浓度低于0.5g/L时，补加5g/L葡萄糖，持续合成红景天苷及其类似物。