[发明专利]肺癌早期筛查试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种肺癌早期筛查试剂盒。

背景技术

肺癌是指源于支气管粘膜上皮的恶性肿瘤，又称为支气管肺癌，其发病率和死亡率在恶性肿瘤中增长最快，是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来，许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌早期诊断率低，0期患者常无任何症状，确诊时不到肺癌患者总数的0.6％；0期肺癌患者术后的5年生存率可达90％以上，Ia期肺癌患者术后5年生存率为60％，而II-IV期病人总的5年生存率仅为5％-40％。目前外科治疗是对肺癌患者首选和最主要的治疗方法，只有在病变早期得到诊断，早期治疗，才能获得较好的疗效。因此，提高肺癌早期诊断率，“早期发现、早期诊断、早期治疗”是降低肺癌死亡率的重要措施。然而，由于肺癌早期诊断检测技术的限制，80％的肺癌患者在确诊时已经失去了手术治疗的机会。

目前对于肺癌的早期诊断方法包括X射线、CT检测、痰细胞学检查等病理诊断方法以及其它生化指标的检测，这些检测方法都属于肿瘤形成后诊断。临床研究早已证实，肿瘤团块一旦形成，癌细胞通过不同途径迁移到其它部位克隆生长。虽然也有针对肺癌相关肿瘤基因的mRNA早期筛查技术，如RT-PCR、real-time PCR和荧光原位杂交等，但目前的检测主要基于PCR反应原理，具有易污染、假阳性率高等缺陷，而传统的RNA荧光原位杂交本身具有信号灵敏度低的缺点。此外，缺乏特异性的早期筛查分子标志物也是限制肺癌早期筛查的重要因素。因此，急需一种针对肺癌早期筛查的分子标志物，以及特异性强、灵敏度高的检测方法，能在基因的一级转录功能产物(mRNA水平)上做更精确的早期筛查和诊断。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性强、灵敏度高的肺癌早期筛查试剂盒。

实现上述目的的技术方案如下。

一种肺癌早期筛查试剂盒，包括针对检测目标基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述目标基因包括有肺癌筛查基因、非血源细胞相关基因，所述肺癌筛查基因选自TTF-1，LUNX，NSE，EGFR，P63，CEA中的至少两种；所述非血源细胞相关基因选自CK7，CK19，hTERT，VIM，PIM-1，Survivin中至少两种；所述信号放大系统包括有末端修饰有荧光基团的扩增探针，或包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针，不同种类目标基因的荧光基团互不相同；其中，

所述捕获探针用于连接目标基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与待检测的目标基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和目标基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别目标基因mRNA的捕获探针的P2序列相同；

所述扩增探针连接捕获探针与荧光基团，或连接捕获探针与标记探针，每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与相应捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

所述标记探针连接扩增探针与荧光基团，每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团，不同种类目标基因的荧光基团互不相同。

在其中一个实施例中，所述目标基因还包括排除基因mRNA，所述排除基因选自CD45、CD34、CD105、CD144、CD146、VWF中至少两种。