[发明专利]一种维生素B2高产菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种维生素B2高产菌株的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：

a)原始菌株的预处理：将枯草芽孢杆菌原始菌株涂布于平板培养基上进行培养，培养得到的平板用蒸馏水进行洗吹，得到枯草芽孢杆菌原始菌株的菌液；

b)将步骤a)得到的菌液在无菌条件下进行紫外诱变，得到紫外诱变菌株；

c)将步骤b)得到的紫外诱变菌株用甲基磺酸乙酯进行化学诱变，得到复合诱变菌株；

d)将步骤c)得到的复合诱变菌株接种到不同代谢底物类似物的基本培养基中进行培养驯化；

e)将经过上述步骤处理得到的菌株接种到营养培养基中进行培养，得到的营养培养物接种到发酵培养基中进行培养，筛选出生产维生素B2最高的菌株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a)中，平板培养基为：酵母粉4.5-5.5g/L，氯化钠9.5-10.5g/L，胰蛋白胨9.5-10.5g/L，琼脂粉17.5-18.5g/L，pH7.0；培养温度均匀为37℃，培养时间为24-36小时。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b)中，紫外诱变时间为30-60s，诱变高度为40-80cm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c)中，甲基磺酸乙酯诱变剂量为0.05-0.5mol/L，诱变时间为20-60分钟。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d)中代谢底物类似物包括8-氮鸟嘌呤、8-氮杂腺嘌呤、6-氮杂胸腺嘧啶、DL-蛋氨酸亚砜、玫瑰黄素，浓度为10-100mg/L；将上述代谢底物类似物进行随机组合，分别加入到经过紫外诱变、化学诱变后得到的复合诱变菌株的菌液中，在基本培养基中进行培养。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：基本培养基为：葡萄糖4.5-5.5g/L，硫酸铵0.15-0.25g/L，磷酸氢二钾1.5-2g/L，磷酸二氢钾0.5-0.7g/L，柠檬酸钠0.1-0.3g/L，色氨酸0.04-0.06g/L，琼脂粉15-17g/L，pH7.0；培养温度均匀为37℃，培养时间为24-48小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤e)中，营养培养基为：葡萄糖9.5-10.5g/L，蛋白胨9.5-10.5g/L，酵母抽取物4.5-5.5g/L，牛肉膏4.5-5.5g/L，氯化镁3.5-4.5g/L，琼脂15-17g/L，pH7.2；培养温度均匀为37℃，培养时间为24-48小时。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤e)中，发酵培养基为：葡萄糖80-90g/L，酵母粉8-15g/L，酵母抽取物4.5-5.5g/L，柠檬酸钠4.5-5.5g/L，七水硫酸镁0.4-0.6g/L，磷酸氢二钾0.5-1.5g/L，磷酸二氢钾0.4-0.6g/L，pH7.0；培养温度均匀为37℃，培养时间为48-72小时。