[发明专利]一种用于培养人间充质干细胞的无动物源成分培养基

说明书

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，具体涉及一种用于培养人间充质干细胞的无动物源成分培养基。

背景技术

间充质干细胞【mesenchymal stem cells,MSC】是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，属于多能干细胞，MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。

传统的间充质干细胞培养方法使用的培养基大都含有动物血清，一方面造成成纤维细胞的污染，影响角质细胞生长，加速角质细胞分化；另一方面由于血清和成分不明的蛋白的存在，对细胞生物学、毒理学、病理学等基础研究形成干扰；同时采用添加血清的培养基构建的人工组织进行体内移植，可以使受者体内产生抗牛蛋白抗体引起免疫反应，从而导致患者尤其在重复输注干细胞治疗后治疗失效等不安全因素。

当前也有一些公司开发的新一代无血清培养基，如Invitrogen 开发MSC SFM XenoFree 无血清培养基、加拿大stemcell 公司开发了MesenCultTM-XF Medium 无血清培养基、BD 公司开发的BDMOSAICTM Hmsc SF Medium 和CellGenix 开发的Serum-free MSC Medium 等。但这些培养基价格昂贵，在培养MSC 过程中都需要使用附属产品进行细胞培养瓶的包被处理。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种增殖能力强、适合于临床应用的间充质干细胞的无动物源成分培养基。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于培养人间充质干细胞的无动物源成分培养基，包括下列成分，以浓度计：

重组人胰岛素：1~100ug/ml；

碱性成纤维细胞生长因子：1~50ng/ml；

人转铁蛋白：1~50ug/ml；

亚硒酸：1~80ug/ml；

丝氨酸：1~300ug/ml；

氯化胆碱：1~200ug/ml；

腺嘌呤：1~60ug/ml；

单乙酰胺：1~100ug/ml；

磷酰乙醇胺：0.01~10mmol/ml；

孕酮:1~40pg/ml

三碘甲状腺氨酸:1~50pg/ml；

人血浆：1~100ul/ml。

作为优选，本发明所述的一种用于培养人间充质干细胞的无动物源成分培养基，包括下列成分：

重组人胰岛素：1~50ug/ml；

碱性成纤维细胞生长因子：1~20ng/ml；

人转铁蛋白：1~20ug/ml；

亚硒酸：1~30ug/ml；

丝氨酸：1~150ug/ml；

氯化胆碱：1~100ug/ml；

腺嘌呤：1~30ug/ml；

单乙酰胺：1~20ug/ml；

磷酰乙醇胺：0.05~1mmol/ml；

孕酮:1~10pg/ml

三碘甲状腺氨酸:1~20pg/ml；

人血浆：1~50ul/ml。

更有选地，本发明所述的一种用于培养人间充质干细胞的无动物源成分培养基，包括下列成分：

重组人胰岛素：5ug/ml；

碱性成纤维细胞生长因子：4ng/ml；

人转铁蛋白：5ug/ml；

亚硒酸：6.84ug/ml；

丝氨酸：105ug/ml；

氯化胆碱：89.3ug/ml；

腺嘌呤：12.2ug/ml；

单乙酰胺：14ug/ml；

磷酰乙醇胺：0.1mmol/ml；

孕酮:3.145pg/ml

三碘甲状腺氨酸:13.46pg/ml；

人血浆：15ul/ml。

优选的，所述的一种用于培养人间充质干细胞的无动物源成分培养基，还包括基础培养基，所述基础培养基为高糖DMEM 培养基。

所述的一种用于培养人间充质干细胞的无动物源成分培养基在人脂肪间充质干细胞和人脐带间充质干细胞培养中的应用。

本发明的有益效果为：