[发明专利]红色糖多孢菌胞内辅酶A和有机酸的提取方法

权利要求书

1.一种从红色糖多孢菌胞内提取辅酶A类物质的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)采用液氮灭活的方法对红色糖多孢菌培养物进行灭活，获得经处理的细胞样品；

(2)采用液氮研磨提取的方法对步骤(1)的经处理的细胞样品进行提取，获得含有辅酶A类物质的胞内提取物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的辅酶A类物质包括：辅酶A；乙酰辅酶A；丙酰辅酶A；丙二酰辅酶A和/或琥珀酰辅酶A。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的液氮灭活的方法包括：将红色糖多孢菌培养物加入到含有液氮的容器中，进行灭活。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的液氮研磨提取的方法包括：

(a)将细胞样品置于液氮预冷的研钵中，冻干；

(b)研钵中加入液氮，在存在液氮的情况下进行研磨；

(c)研磨完毕，向步骤(b)获得的样品中加入甲醇，转移至离心管中，振荡，离心，获取上清，其中含有辅酶A类物质。

5.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步骤(2)之后，还包括步骤：

(3)从获得的含有辅酶A类物质的胞内提取物中，分离出辅酶A类物质。

6.一种从红色糖多孢菌胞内提取有机酸的方法，其特征在于，所述方法包括：

(i)采用液氮灭活的方法对红色糖多孢菌培养物进行灭活，获得经处理的细胞样品；

(ii)对步骤(i)获得的细胞样品进行洗涤，清除细胞外的有机酸，获得经洗涤的细胞样品；

(iii)采用沸乙醇提取法对步骤(ii)获得的经洗涤的细胞样品进行提取。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的有机酸包括：丙酮酸，延胡索酸，琥珀酸，草酰乙酸，苹果酸，柠檬酸和/或α-酮戊二酸。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(i)中，所述的液氮灭活的方法包括：将红色糖多孢菌培养物加入到含有液氮的容器中，进行灭活。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(ii)中，所述的洗涤包括：采用0.9％NaCl水溶液试剂，洗涤1～5次。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，采用0.9％NaCl水溶液试剂洗涤2～4次。

11.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(iii)中，所述的沸乙醇提取法包括：

(S1)使细胞样品悬浮于乙醇溶液中；

(S2)将步骤(S1)获得的样品放到沸水浴中加热；

(S3)将步骤(S2)加热完毕的样品冷却后，在0±2℃离心，获取上清，其中含有有机酸。