[发明专利]一种HMGR基因mRNA在梨属砧穗间传递的分子鉴定方法

权利要求书

1.一种HMGR mRNA分子在梨属砧穗间传递的分子鉴定方法，包括如下步骤：

(1)鸭梨为接穗，杜梨为砧木进行试管苗微嫁接；

(2)分别提取杜梨、鸭梨以及嫁接后砧木与接穗的总RNA，反转录成cDNA，第一次PCR扩增HMGR基因的全长，以此为模板进行第二次PCR，得到各自的HMGR基因片段；

(3)限制性内切酶对第二次PCR产物进行酶切，比较嫁接前后的酶切谱图鉴定传递情况；

步骤(2)中第一次PCR所采用的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示；第二次PCR所采用的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7-8所示；

所述限制性内切酶为BamHⅠ；

经由15％聚丙烯酰胺凝胶进行分离酶切产物，鸭梨的产物得到18bp和193bp两个片段，杜梨产物不能被酶切，只有一个211bp的片段；

在嫁接后的前7天，砧木和接穗各组织都表现为各自的特异性酶切条带，从第8天开始，除了杜梨茎段木质部外，其余各组织都有新的酶切条带出现，接穗鸭梨各部位除了含有自身特异性酶切条带之外，同时还增加了砧木杜梨的特异性酶切条带；而砧木杜梨的茎段韧皮部除了含有自身特异性酶切条带之外，同时也增加了接穗鸭梨的特异性酶切条带；

用于提取接穗总RNA的样品选自微嫁接1-10天接穗鸭梨的叶片、茎尖、茎段韧皮部、嫁接口或砧木杜梨茎段韧皮部与木质部。

2.根据权利要求1所述的分子鉴定方法在果树栽培上的应用。