[发明专利]一种芽孢杆菌HZ16中抑制军团菌活性物的制备方法

说明书

本发明公开了一株能够产抑制军团菌活性物的芽孢杆菌以及利用该芽孢杆菌制备抑制军团菌活性物的方法。本发明首次证明了该株菌的代谢产物的抑制军团菌活性，以该活性作为评估标准对该菌株产生较强活性的发酵条件进行研究。旨在提供一种利用芽孢杆菌生产抑制军团菌活性物的新方式，为进一步寻找和开发有效的肺炎治疗药物提供科学依据。

技术领域

本发明涉及微生物活性物开发利用领域，具体涉及一株芽孢杆菌菌株的活性，以及发酵制备生物活性组分的工艺方法，及其产物在新药开发方面的应用。

背景技术

一株芽孢杆菌HZ16显示了针对军团菌属独特的高选择抑制活性。不同于一般芽孢杆菌产生广谱抗生素的特点，该株菌对军团菌属以外的革兰氏阳性及阴性菌的抑制活性太弱或未检出。广谱抗生素的缺点是在作用于一种微生物的同时还可能杀死其它有益或无害的微生物，并在形成耐药性时产生普遍的耐药性，为今后其它疾病的治疗带来困难。

芽孢杆菌属是芽孢杆菌目芽孢杆菌科最大的一属，也是产生医用抗生素的三个主要来源之一。外界环境对微生物次生代谢产物的产生有很大的影响，不同的发酵培养条件可以产生不同结构，不同生物活性的化合物。为了得到更有价值的活性物，必须对菌株和发酵条件进行摸索和研究。

发明内容

本发明首次证明了该株芽孢杆菌代谢产物的抑制军团菌活性，并对其产生较强活性的发酵条件进行研究。利用生物质资源的可再生、易获得、成本低、无污染等特点，开展生物制药的研发。为实现上述目的，本发明拟采用如下方案：

本发明一方面涉及一株能够产抗军团菌活性物的芽孢杆菌，所述的芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.12406。本发明另一方面还涉及使用上述芽孢杆菌制备抗军团菌活性物的应用，优选的，所述的抗军团菌活性物能够用于制备治疗肺炎药物。

本发明另一方面涉及从芽孢杆菌HZ16制备抗军团菌活性物的方法，所述的制备方法包括以下步骤：

将纯化得到的芽孢杆菌HZ16接种到培养基上，发酵后获得固体培养菌落，接种到摇瓶培养基发酵获得发酵液，将发酵获得的产物冷冻干燥除掉水分，用有机溶剂提取获得粗提物。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的培养基pH值为4-8或者为4、5、6、7、8。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的培养基为LB、复合培养基、PDA、查氏、M₂、M₂50％SW、高氏等。

培养基配方：

复合培养基(g/L)：氯化钙0.5，磷酸二氢钾(KH₂PO₄)0.1，氯化钾(KCl)0.05，硫酸镁(MgSO₄)0.1，葡萄糖20.0，蛋白胨15。

PDA培养基(g/L)：土豆200，葡萄糖200，1.1％琼脂。

查氏培养基(g/L):蔗糖30，NaNO₃ 3，K₂HPO₄ 1，FeSO₄ 0.01，KCl 0.5，MgSO₄·7H₂00.5。

M₂培养基：麦芽提取物10，葡萄糖4，酵母提取物4。

M₂50％SW培养基：麦芽提取物10，葡萄糖4，酵母提取物4，柠檬酸铁0.05，NaCl9.725，MgCl₂·6H₂O 4.4，Na₂SO₄ 1.72，CaCl₂ 0.9，磷酸氢钠0.01，SiO₂0.0075。