[发明专利]一种时间分辨荧光标记物的荧光检测方法及其装置

说明书

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种时间分辨荧光标记物的荧光检测方法及其装置。

背景技术

随着临床医学和科技进步，荧光免疫技术发展出多种实用检测技术，如电化学荧光免疫分析（ECLI）、化学发光免疫分析（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）等荧光免疫分析技术。这些技术均通过对标记物（示踪探针）检测来确定被检测物，标记物通过免疫反应法、化学反应法、生化反应法、链霉亲和素和生物素等包被技术，制作成具有较高特异性的探针，探针通过相应的反应与目标检测物质结合；再通过荧光仪对示踪探针进行检测，获得目标物质的浓度等相关信息。另一方面包被技术也在发展，除传统的96微孔板包被外，还采用磁微球作为免疫反应的载体，通过控制磁场抓取磁微球，可大大提高包被物的量，增加检测灵敏度，减少反应时间，方便反应过程中的清洗，实验自动化操作，提高系统灵活性和工作效率，如目前比较流行的化学发光免疫分析仪。

针对磁微球作为免疫反应载体的设备，如：免疫荧光分析仪、化学发光荧光分析仪，由于反应过程中需要进行若干次的清洗，最后对反应池进行整杯液体的荧光标记物含量，以获得反应池检测目标物的浓度值。以上这些常规的荧光标记检测技术，都存在一个无法克服的问题就是：由于反应过程经过了清洗步骤，无法保证每次试验时反应池内的磁微球的剩余数量保持一致。存在两大缺陷：

1、检测磁微球以低浓度分布在样本溶液中，容易因为磁微球分布不均匀或清洗不彻底造成检测结果偏差；

2、虽然磁微球取样精确，但经过多次清洗之后，反应池中磁微球的剩余数量却不能确定。

时间分辨荧光分析是以稀土离子标记抗原或抗体、核酸探针和细胞等为特征的超灵敏度检测技术，它克服了酶标记物的不稳定、化学发光仅能一次发光且易受环境干扰、电化学发光的非直接标记等缺点。使非特异性信号降低到可以忽略的程度，达到了极高的信噪比，从而大大地超过了放射性同位素所能达到的灵敏度，且还具有标记物制备简便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰和应用范围十分广泛等优点，成为继放射免疫分析之后标记物发展的一个新里程碑。

随着检验医学的发展，对微量、超微量的测定会越来越多，时间分辨荧光分析法(TRFIA)具有越来越大的应用空间，但是目前市场上还没有时间分辨荧光分析法全自动检测系统（即随机系统）。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种时间分辨荧光标记物的荧光检测方法及其装置。将样品池中的磁微球分成等量的若干份，并对磁微球进行汇集后再完成荧光标记物检测。

本发明为了实现上述发明目的，采用如下技术方案：

一种时间分辨荧光标记物的荧光检测方法，待检测样本溶液中含包被了时间分辨荧光标记物的磁微球，将待检测样本溶液分成等量的若干份，分批次汇聚磁微球并进行荧光标记物时间分辨荧光的检测，得到多次检测的统计结果，从而完成对整个样本溶液中荧光标记物的含量检测；单次时间分辨荧光检测的步骤如下：

1）在两端开口的石英管中持续通入样本溶液，同时启动激发光光源，石英管的一侧设置电磁铁，在电磁铁的磁场作用下，使流动溶液中的磁微球驻留在电磁铁的前端，随着液体的流动，石英管内的磁微球汇集数量不断增加，形成汇集点；

2）停止通入样本溶液，光线通过激发光路聚焦在汇集点的磁微球上，经至少10微秒后关闭激发光光源；再经10-2000微秒的设定时间后，收集磁微球结合的荧光标记物的时间分辨荧光信号，并转换为电信号，进行时间分辨荧光标记物的含量检测。

本发明的荧光检测方法通过电磁铁对磁微球的磁力作用，将磁微球聚集在石英管的检测区域，使磁微球在局部区域的浓度提高了成千倍，荧光标记物的荧光强度则可提高上万倍，而背景干扰荧光没有相应的提高，从而提高系统的抗干扰能力和灵敏度高。

优选地，待磁微球汇集 0.1秒至10秒后，停止通入样本溶液。控制磁微球的汇集时间从而使每次荧光检测时，磁微球的汇集数量都相同。

进一步优选地，所述电磁铁的磁力恒定为 1～2000mg，保证磁微球聚集稳定。

进一步优选地，所述液体在石英管中的流速恒定为0.1～100厘米/秒，此流速下的磁微球能快速聚集。

本发明所述石英管为中空透明管，其内径为0.1-10mm，能够限制磁微球向外延聚集，使有限的空间内磁微球分布均匀且数量稳定，并且确保在磁微球汇集点处，获得更高的磁微球总数与液体容积的占比，这样可大大提高时间分辨荧光强度，提高系统信噪比。