[发明专利]戊炔草胺套罩刺葡萄芽的倍性诱变方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种戊炔草胺套罩刺葡萄芽的倍性诱变方法。

背景技术

刺葡萄(V.davidii.Foex)属东亚种群，2n＝2x＝38，是我国南方主要野生葡萄之一，主要分布在长江以南亚热带温湿雨林丛山中，能较好适应高温多湿气候条件，对葡萄常患病害白腐病、炭疽病、黑痘病等具有很好抗性，适应性强，这一独特表现为南方葡萄无公害化种植描绘了广阔前景，也为葡萄耐湿性砧木及新品种选育等方面提供了优秀资源与材料。刺葡萄的新蔓、嫩叶与果实色彩非常丰富，观赏效果与价值比普通葡萄更高，是公园、庭院等处优良垂直观赏绿化植物。大多数刺葡萄果粒的皮色为兰黑色或兰紫色，药用效果与价值比一般葡萄更显著，更有利于人们身体健康。与栽培于长江以南的其它葡萄相比，刺葡萄更适于葡萄的加工与酿酒，其附加产品更丰富，附加值更高。因刺葡萄具有上述几方面独特表现，长江以南许多地方的农民已把野生刺葡萄家植化并获得了极大成功。

刺葡萄果粒较小，果内含种子较多。已有利用秋水仙素处理刺葡萄已萌动种子和生长芽，诱其染色体加倍而成功获得刺葡萄多倍体的研究报道。但秋水仙素是一剧毒植物碱，操作过程中稍有不慎，即对处理对象和操作者带来极大危害。

现在还没有将戊炔草胺运用于刺葡萄并诱导刺葡萄染色体加倍的成功报道，本研究的意义是首次利用戊炔草胺(Propyzamid)作用于已处于生长状态的刺葡萄芽并对其进行倍性诱导，为得到粒大优质，少籽或无籽的刺葡萄多倍体新品种提供优良的种质资源与新品系。

发明内容

本发明解决的技术问题是，将戊炔草胺应用于刺葡萄芽的倍性诱变，并探索适宜的倍性诱变条件。

本发明的技术方案是，提供一种戊炔草胺套罩刺葡萄芽的倍性诱变方法，包括以下步骤：

(1)将戊炔草胺溶于二甲基亚砜溶剂中，再用水稀释至戊炔草胺的质量浓度0.003％-0.007％，获得戊炔草胺溶液；

(2)将所述戊炔草胺溶液制成戊炔草胺琼脂膏，套罩于正处于萌芽状态的刺葡萄芽上5-7天，即完成刺葡萄芽的倍性诱变。

进一步地，所述戊炔草胺溶液中二甲基亚砜的质量浓度为0.04％-0.08％。

进一步地，在温度为13-18℃的条件下将所述戊炔草胺琼脂膏套罩在刺葡萄芽上。

进一步地，所述戊炔草胺溶液中最适戊炔草胺的质量浓度为0.005％。

进一步地，所述套罩时间为6天。

戊炔草胺(Propyzamide，CAS：23950-58-5，分子式:C₁₂H₁₁C_l2NO；分子量256.13)又叫快敌蜱；拿草特；戊炔草胺；炔苯酰草胺；戊炔草胺标准品；戊炔草胺标准溶液等。它属除草剂的一种，对植物微管蛋白有很强的结合力，能有效阻止植物微管的聚合，诱导植物染色体加倍。与秋水仙素相比，戊炔草胺具有低毒性、低浓度、低成本、高效率诱导染色体加倍等特点，目前的市场价格为1g/元。

本发明的主要创新在于：1、本发明利用套罩法，使用戊炔草胺溶液处理刺葡萄芽，成功地对刺葡萄芽实现了倍性诱变。戊炔草胺溶液浓度对刺葡萄芽诱变率的影响很大，本发明通过实验探索出诱导刺葡萄芽发生倍性变异的合适戊炔草胺溶液浓度为0.003％-0.007％(本发明中的浓度均指质量浓度)，最佳浓度为0.005％，最佳套罩时间为6天；该用量与秋水仙素的用量相比，浓度低了一百多倍。2、正处于萌芽状态的刺葡萄芽的细胞分裂旺盛，本发明在此阶段进行套罩，并通过合理控制套罩时间，染色体加倍的概率提高，使得刺葡萄芽成功发生倍性变异。3、用二甲基亚砜(DMSO)做戊炔草胺淡黄色晶状粉末的溶剂，可以增强戊炔草胺溶液对刺葡萄芽的渗透作用，可以在低戊炔草胺溶液浓度条件下实现较好的渗透，提高刺葡萄芽细胞内染色体诱变效果，避免了刺葡萄芽受更高药剂浓度的渗透作用的影响，降低了葡萄芽的死亡率(刺葡萄芽用0.005％的戊炔草胺琼脂膏套罩6d，萌芽率仍可达66.7％)。

本发明的有益效果是，本发明通过套罩法成功诱导刺葡萄芽而获得了刺葡萄四倍体，套罩使用的戊炔草胺琼脂膏，最合适的浓度为0.005％左右，诱变率高达60％以上。目前，戊炔草胺于生产上普遍做一种除草剂在使用，而秋水仙素是一种从百合科植物中提取的剧毒植物碱，所以无论从浓度、毒性、成本、诱导效率高低等几方面看，植物倍性诱导试验中如能更多地利用戊炔草胺替代秋水仙素作诱变剂，低浓度、低毒性、低成本、高诱导效率的优势将非常明显。

附图说明

图1表示刺葡萄二倍体染色体(2n＝2x＝38)(×5500)；