[发明专利]一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法

权利要求书

1.一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：包括以下步骤：

a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱内35℃下培养8d的平板孢子，用无菌蒸馏水洗脱平板孢子，置于无菌并盛有玻璃珠的三角瓶中，在250～400r/min的震荡装置上震荡6～10h，使孢子活化和分散，孢子分散率在95%以上，在光学显微镜下观察孢子并计数，然后用无菌蒸馏水稀释孢子悬浮液至126个/mL，即得孢子悬浮液并备用；

b）紫外线诱变：取5mL步骤a）制备得到的孢子悬浮液加入直径为9cm平皿，将平皿置于距40W紫外灯25cm处的磁力搅拌器上，照射时间为35～40min，稀释并取0.1mL孢子悬浮液涂布于麦芽汁琼脂培养基平板，整个过程均在红光下进行，然后在35℃避光条件下培养90h，最后根据平皿菌落数计算致死率；

c）菌株筛选：

c1)以步骤b中致死率为70%～80%的菌株为基础，挑选其中HC值大于平均值的变异菌株作为初筛菌株，以备复筛，HC值=透明圈直径/菌落直径；

c2)取步骤c1)得到的菌株，接种于含60mL液体土豆培养基的锥形瓶内，在35℃下300r/min的摇床内培养90h，通过福林酚法测定酸性蛋白酶酶活力；选取诱变后得到的酶活力大于平均值的变异菌株连续传代6次，得到高产菌株。

2.如权利要求1所述的一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：所述的步骤a）中的震荡装置为落地式大容量恒温震荡摇床，震荡速度为250r/min，震荡时间为8h。

3.如权利要求1所述的一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：所述的步骤b）中的麦芽汁琼脂培养基由糖度为5～6°Brix的过滤麦芽汁添加质量分数为2%的琼脂，然后调pH值为6.0，并在0.2MPa压力下灭菌40min后制备得到。

4.如权利要求1所述的一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：所述步骤b）中避光条件下培养时，为避免光复活效应，麦芽汁琼脂培养基平板采用黑布进行遮掩。