[发明专利]一种献王枣的组培快繁方法

权利要求书

1.一种献王枣的组培快繁方法，其特征在于，步骤如下：

(1)外植体的建立：于春季萌芽前,剪取1年生枣头枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，用自来水冲洗10分钟后，于质量浓度为0.4%洗衣粉溶液中浸泡8-12分钟，再用自来水冲洗干净，然后用质量浓度为75%的酒精浸泡35s，无菌水冲洗3-4次，沥干水分，用质量浓度为1.0%次氯酸钠溶液消毒10-12分钟，然后用无菌水冲洗7-8次，用镊子夹取清洗好的茎段，在无菌操作台上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，剪取1.5—2.5cm 的带芽茎段作为外植体；

（2）启动培养：将灭菌后的外植体接种到经灭菌后的启动培养基中培养，培养条件为温度 25～27℃ ,光照强度为2400-2500lx，光照时间15-16h/d，在培养室中无菌培养23-25天后，将没有染菌的材料切成带 1～2 个芽的茎段接种于分生培养基中培养，分生培养基的成分为：MS+ N⁶苄基腺嘌呤2.1mg/L+萘乙酸0.4mg/L+维生素C1.6-1.8mg/L+精氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.0；在光照强度为2300-2400lx，光照时间14-15h/d，温度为26-27℃的条件下，培养30-35天；

（3）继代培养：将植株茎段转接入经消毒后的继代培养基中培养，在培养温度为25-26℃，光强 2000～2500lx ，光照时间为17h/d的条件下培养33-35d；

（4）生根培养：在无菌条件下，剪取长2-3cm继代培养得到的带叶茎段，插入生根培养基中进行生根培养；培养温度 26～28℃，光强2000～22001x，光照时间15h/d；

（5）炼苗：当经过生根培养后的生根试管苗根长1.0～2.0 cm时，将组培苗进行室内炼苗，炼苗温度为：27-28℃，光照强度为5000-6500lx，室内瓶炼5-6天后，敞口炼苗4天；

（6）移栽：取出试管苗，洗净根上的培养基，移栽到用质量浓度为0.2%KMnO₄溶液消毒过的椰糠+蛭石+细河沙+草炭按照2-3:5:1：0.5的比例做基质的营养杯中，浇足水，保持空气湿度为85％-90%，温度 25～26℃，避免阳光直射， 35-38 天后，移出温室进行全光照炼苗6-7d，及时浇水，然后移栽大田；

所述步骤（2）中的启动培养基的成分为：MS+ N6苄基腺嘌呤1.3mg/L +萘乙酸0.3mg/L +维生素C 1.0mg/L +3%糖蜜+琼脂6-7g/L，培养基pH 值为 6.2；

所述步骤（3）中继代培养基的成分为：MS+ N6 苄基腺嘌呤 2.1mg/L+萘乙酸0.45-0.55mg/L +维生素C 0.8mg/L+维生素B6 1.4-1.6mg/L+精氨酸1.8～2.1mg/L +4%糖蜜+琼脂8g/L, 培养基pH 值为6.1；

所述步骤（4）中生根培养基的成分为：1/2MS+ NAA 0.02mg/L+ IAA0.2 mg/L+IBA 0.7～0.9 mg/L+4.5%糖蜜+琼脂8g/L, pH=6.0-6.2。