[发明专利]一种月光枣的组培快繁方法

权利要求书

1.一种月光枣的组培快繁方法，其特征在于，步骤如下：

(1)外植体的建立：于5月中旬,剪取2年生枣头枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，用自来水冲洗15分钟后，于质量浓度为0.4%洗衣粉溶液中浸泡12-15分钟，再用自来水冲洗干净，然后用质量浓度为75%的酒精浸泡35s，无菌水冲洗5-6次，沥干水分，用质量浓度为1.0%的次氯酸钠溶液消毒10-12分钟，然后用无菌水冲洗7-8次，用镊子夹取清洗好的茎段，在无菌操作台上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，剪取1.5—2.5cm 的带芽茎段作为外植体；

（2）启动培养：将灭菌后的外植体接种到经高温灭菌的启动培养基中培养，培养条件为温度 27～28℃ ,光照强度为2100-2300lx，光照时间17h/d，在培养室中无菌培养24-26天后，将没有染菌的材料切成带 1～2个芽的茎段接种于分生培养基中培养，分生培养基的成分为：MS+ N⁶苄基腺嘌呤2.0mg/L+萘乙酸0.35-0.40mg/L +维生素H 1.5mg/L+甘氨酸1.8-1.9mg/L+1%白砂糖+3%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.1；在光照强度为2300-2500lx，光照时间16h/d，温度为26-27℃的条件下，培养30-35天；

（3）继代培养：将植株茎段转接入经消毒后的继代培养基中培养，在培养温度为26-28℃，光照强度2400～2600lx ，光照时间为16h/d的条件下培养30-33d；

（4）生根培养：在无菌条件下，剪取长2-2.5cm继代培养得到的带叶茎段，插入生根培养基中进行生根培养；培养温度26～28℃，光强2100～23001x，光照时间15h/d；

（5）炼苗：当经过生根培养后的生根试管苗根长 1.0～2.0 cm时，将组培苗进行室内炼苗，炼苗温度为：26-28℃，光照强度为4500-6500lx，室内瓶炼5天后，敞口炼苗5-7天；

（6）移栽：取出试管苗，洗净根上的培养基，移栽到用重量浓度为0.2%KMnO₄溶液消毒过的椰糠+细河沙+草炭按照2-3:5-6:1的比例做基质的营养杯中，浇足水，保持空气湿度为85％-90%，温度 26～28℃，避免阳光直射，35-38天后，移出温室进行全光照炼苗7-10d，及时浇水，然后移栽大田；

所述步骤（2）中的启动培养基的成分为：MS+ N⁶苄基腺嘌呤1.35mg/L +萘乙酸0.25-0.28mg/L +维生素C 1.1mg/L +1%白砂糖+2.5%糖蜜+琼脂6-7g/L，培养基pH 值为 6.1；

所述步骤（3）中继代培养基的成分为：MS+ N⁶苄基腺嘌呤2.1mg/L+萘乙酸0.42mg/L +维生素C 0.5-0.8mg/L+维生素H 1.6-1.8mg/L+甘氨酸1.7mg/L+1%白砂糖+3%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.1-6.2；

所述步骤（4）中生根培养基的成分为：1/2MS+ NAA 0.03-0.04mg/L+ IAA 0.16-0.18mg/L+IBA 0.8mg/L+1%白砂糖+3.5%糖蜜+琼脂8g/L, pH=6.2。