[发明专利]一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种液体菌种的制备方法，尤其涉及一种以菌糠提取液为原料制备金 针菇液体菌种的方法。

背景技术

金针菇(Flammulinavelutipes)，学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、朴菇、冬菇、 冻菌、金菇、智力菇等。金针菇营养丰富，它的氨基酸含量高于一般菇类，尤其是赖氨酸的含 量非常高，具有促进儿童智力发育的功能。研究表明，金针菇还具有很好的抗癌作用。因此， 金针菇不仅是一种美味食品，又是很好的保健品，近年来更是倍受人们青睐，其产量逐年上 升。通过液体菌种培养金针菇的方法具有生产周期短、菌龄一致、萌发快、出菇齐、活力强、 污染率低的优点，因此金针菇的现代化工业生产多以液体菌种栽培模式为主，从而将传统 的固体菌种栽培模式逐渐取代。但目前国内金针菇液体菌种的制备方法较为单一，培养基 配方成分均从市场购买，不仅价格昂贵并且组分单一，这在一定程度上限制了金针菇液体 菌株的活力提升空间；此外，培养基配方的单一性限制了对金针菇生产过程中产生的废弃 物的重新利用，造成了极大的资源浪费与环境压力。

发明内容

为了解决上述技术所存在的不足之处，本发明提供了一种以菌糠提取液为原料制 备金针菇液体菌种的方法。

为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：一种以菌糠提取液为原料制 备金针菇液体菌种的方法，包括以下步骤：

A、制备菌糠提取液：富集金针菇采收后剩余的菌糠，按照料水比1：25进行配制，室 温下静止24h，然后用八层纱布或过滤装置过滤，滤液即为菌糠提取液；

B、配制摇瓶培养基：摇瓶培养基的配方为：

一级白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、

KH₂PO₄分析纯1.24g、MgSO₄·7H₂O分析纯1.28g、

菌糠提取液2000mL；

调pH至6.0～6.9后，将上述培养基分装至含转子的三角烧瓶中；用棉塞塞紧三角 烧瓶瓶口，并用铝箔纸包紧瓶口，121℃下高压灭菌30～60min；灭菌结束后，冷却至室温；

C、接种：在无菌环境下，用接种环钩取金针菇母种菌块8～10块，转接到冷却后的 摇瓶培养基中，20～25℃条件下摇瓶培养7天，摇床转速150r/min；

D、菌球形态及菌丝含量测定：摇瓶培养结束后，首先观察培养瓶内菌球形态及液 体澄清度，然后用pH计测试菌液的pH，判断菌种的生长状况；再随机抽取三个摇瓶菌种，放 在磁力搅拌器上将菌种搅碎，用注射器吸取10g菌液于已知质量的离心管中，配平后离心弃 上清液，通过称量沉淀和离心管的质量，计算出菌丝的平均含量，并与常规方法制备的菌种 菌丝含量相对比；

E、酶活力测试：随机抽取九个摇瓶菌种，平均分成三组；首先制备粗酶液并绘制葡 萄糖标准曲线；将三组摇瓶菌种在磁力搅拌器上搅拌破碎分别取5mL破碎后的菌液于10mL 离心管内,3500r/min离心10min,取上清液做为粗酶液；得到的三组粗酶液分别进行羧甲基 纤维素酶酶活、半纤维素酶酶活、漆酶酶活的测试，并与常规方法制备的粗酶液酶活进行对 比；

F、发酵罐扩培：按照以下配方进行发酵培养基的配制：

一级白砂糖12595g、140目豆粕粉2025g、

KH₂PO₄分析纯429g、MgSO₄·7H₂O分析纯443g、

菌糠提取液700L；

调pH至6.0～6.9后高压灭菌；将发酵罐内的发酵培养基冷却至室温，接种步骤C中 摇瓶培养结束后的菌液；20～25℃条件下发酵培养7天，通气量0.1MP；

G、制作栽培瓶：称取玉米芯、米糠、麸皮、棉籽壳、大豆皮、啤酒糟、甜菜渣，将上述 原材料搅拌混合25min，然后边加菌糠提取液边继续搅拌40～50min，调制成含水量为65％ ±1、pH为6.3～6.9的混合材料；在栽培瓶中种入上述混合材料，使每瓶标重为1020±20g； 采用五孔打眼法，使料面平整距离栽培瓶瓶口2.0cm，121℃高压灭菌80～100min，冷却至室 温，最后接种步骤F扩培后的发酵液菌种。

葡萄糖标准曲线的绘制方法如下：