[发明专利]基于化学发光法检测MUC‑16含量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，具体地涉及一种基于化学发光法检测MUC-16含量的试剂盒。

背景技术

膀胱恶性肿瘤又称膀胱癌，是发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位的疾病。但因膀胱癌致死者却占各类肿瘤的首位，对生命造成严重威胁。近几年来，对宫颈癌及宫体癌的防治，取得了一定的成效，而有关膀胱癌的防治方面收效相对较小。因此，在膀胱癌是造成死亡原因最高的一种肿瘤。造成其病死率居高不下的原因是由于膀胱恶性肿瘤生长部位隐蔽，无法直接看到，早期膀胱恶性肿瘤症状不明显，仍缺乏简便实用的诊断方法。

近年来血清MUC-16(上皮性膀胱癌的单克隆抗体)、CA19-9(结肠、直肠癌的单克隆抗体)已被用于监测膀胱癌病人。膀胱癌病人血清MUC-16高达100U/ml以上(正常在35U/ml以下)者占71％，CA19-9高达100U/ml以上(正常在37U/ml以下)者占30％。但这两个指标的诊断精确性和灵敏度均不高，目前，尚未发现一个能够实现膀胱癌诊断精确性和特异性较高的生物标记物。因此急需发明一种新的诊断工具来提高膀胱癌的诊断精确度。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于化学发光法检测MUC-16含量的试剂盒，该检测试剂盒的检测具有简便、快速、灵敏度高、线性范围宽和稳定性好等优点。

本发明的技术方案为：化学发光法检测MUC-16含量的试剂盒包括抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒、异硫氰酸荧光素标记的MUC-16单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的MUC-16单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液、稀释液、清洗液、MUC-16系列校准品，其中，本发明的试剂盒的反应试管的材料选自透明的聚苯乙烯、聚乙烯和聚丙烯中的至少一种。

优选地，所述的抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒由羧基修饰的磁微粒表面共价结合抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体制备得到，其中，所述的磁微粒粒径为0.7～3μm，内核为四氧化三铁表面包裹有羧基基团。在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的待测样品基质中快速分离、纯化出目的待测物是临床检验工作者面临的难题之一。磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

优选地，所述的抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒悬浮于所述稀释液中，配制成0.5～2μg/mL的磁微粒溶液；所述异硫氰酸荧光素标记的MUC-16单克隆抗体溶解在所述稀释液中，分别配制成0.25～0.5μg/mL异硫氰酸荧光素标记的MUC-16单克隆抗体溶液；所述碱性磷酸酶标记的MUC-16单克隆抗体溶解在所述稀释液中，分别配制成0.25～0.5μg/mL碱性磷酸酶标记的MUC-16单克隆抗体溶液。

优选地，所述的异硫氰酸荧光素标记的MUC-16单克隆抗体溶液通过透析法制备得到。

所述的碱性磷酸酶标记的MUC-16单克隆抗体通过分别活化MUC-16单克隆抗体、碱性磷酸酶溶液后，将活化后的MUC-16单克隆抗体与活化后的碱性磷酸酶溶液混合后得到。

优选地，所述的化学发光底物液为0.1～0.3M、pH值为8～10的Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液含有0.2～0.4mg/mL的二氧杂环乙烷，更优选地，所述Tris-HCl缓冲液含有0.3mg/mL的二氧杂环乙烷。

所述的稀释液为0.05～0.5M、pH值为7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液且所述稀释液含0.4～0.6wt％的牛血清白蛋白BSA和0.05～0.3wt％的叠氮化钠；所述的清洗液为0.1～0.2M、pH值为8～9的Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液含有0.01～0.04wt％的吐温20和15～20wt％的氯化钠，更优选地，所述的清洗液为0.1M、pH值为8Tris-HCl缓冲液中加入质量百分比为0.02％的吐温20和15％的氯化钠。

所述的MUC-16系列校准品的浓度范围为0～50ng/mL。

本发明的有益效果：本发明提供的试剂盒结构简便，使用方便，灵敏度高，特异性强，检测范围宽，操作简单，试剂盒成本低，无放射性污染，临床适用性强，更适用于我国临床检测，适合在国内的各级医院推广使用。

具体实施方式