[发明专利]一种细菌表面ABO血型抗原的检测方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种细菌表面的ABO血型抗原的检测方法。所述检测方法基于细菌表面多糖的结构与人类ABO血型抗原相似而具有血型物质活性的特点，通过细菌固定化处理并利用人的ABO血型天然抗体与细菌表面多糖相互作用，以多功能酶标仪实现细菌表面ABO血型抗原的检测。利用本发明提供的细菌表面ABO血型抗原的检测方法，简单易操作，稳定性好，能够实现大批量检测，克服了之前的检测方法需靠肉眼观察凝集情况的弊端，结果更直观可靠，具有极大的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种细菌表面的ABO血型抗原的检测方法。

技术背景

ABO血型系统包含A、B、O和AB型四种血型，其血型抗原的本质是糖蛋白和糖脂，血型是由糖链末端的组成和结构决定的。O型血人的血红细胞(RBC)表面表达H抗原(GlcNAc-β1,4-Gal-α1,2-Fuc)；B型RBC含B抗原，它的非还原端在H抗原的基础上多一个α–1,3半乳糖苷；而A型抗原较为复杂，主要分为A1和A2两种亚型。通常提到的A型抗原指的是A2型，它比H抗原多一个α–1,3-N-乙酰半乳糖胺(α-1,3-N-GalNAc)。

细菌无处不在，在人类生存的环境中，人体口腔、皮肤、肠道等部位均分布着各种各样的细菌。细菌表面多糖以共价或非共价的形式与细菌结合，介导细菌与宿主间的相互作用、保护细菌逃离宿主的免疫清除，有些还是细菌致病的关键毒力因子。由于与细菌表面连接方式的不同，细菌表面多糖可以分为三种类型：脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)和胞外多糖(exo-polysaccharide,EPS)。脂多糖是革兰氏阴性菌外膜的重要组成成分，也叫内毒素，是一种热源和炎症刺激因子。几乎所有革兰氏阴性菌的LPS结构都相同，从内到外依次为类脂A(lipid A)、核心寡糖(coreoligosaccharide)和O-多糖(O-polysaccharide,O-PS)。O-PS也叫O抗原，是由多个寡糖重复单位重复排列构成的，每个重复单位一般由3-6个单糖组成。不同细菌的O-重复单位中有不同的单糖组成，单糖间形成的糖苷键连接位置和立体化学构型不同并且这些重复单位间的连接方式也不同，这些特性使得O-PS成为细胞结构中最多样的成分之一。大肠杆菌中不同的O-PS就达180多种，由于不同的抗原性，大肠杆菌也被分为不同的O-血清型，例如E.coli O86和O157。荚膜多糖是由多个重复单元构成的线性多聚体，常被乙酰基，其它酰基，磷酸基和硫酸基修饰，同样表现出复杂的多样性，例如，能引起肺炎、脑膜炎和血液感染的肺炎链球菌就有90多种不同结构的CPS。胞外多糖是细菌分泌到细胞外的多糖，有些细菌只在生长的对数期和稳定期分泌而有些细菌则在生长的全程均可分泌EPS。EPS通常形成黏液，不与细胞直接连接，一般有大于1000个的重复单位，分子量更大。

由于细菌表面种类繁多的糖结构，不可避免的某些细菌表面多糖会与人类ABO血型抗原相同或相似。E.coli O86的O-多糖(O-PS)重复单元中非还原端三糖Gal-α1,3-(L-Fuc-α1,2)-Gal与人血型B抗原组成和结构相同，当肠道功能失调的人摄入E.coli O86后，80％的O型或者A型个体中anti-B抗体明显提高；并且当鸡摄入E.coli O86后，其体内将会产生anti-B抗体。此外，血型凝集素也能在一定程度上抑制甚至杀死拥有血型物质活性的细菌。人体肠道菌群表面也存在多种多样的糖结构，人体内的ABO血型抗体是否对人体肠道内的菌群产生影响仍有待研究。

早期有实验室用间接免疫抑制实验检测了一些革兰氏阴性菌，发现有近一半的检测细菌中存在能与人类血型抗体发生免疫反应的抗原。但该检测方法耗时费力，需要依靠人的肉眼观察判定结果，且只能检测单一细菌的表面血型抗原。而检索发现，能大批量检测细菌表面ABO血型抗原的方法未见报道，而关于人体肠道菌群表面的ABO血型抗原检测方法更未见报道。基于此，亟待建立和开发新的可以准确批量检测细菌表面ABO血型抗原的方法。