[发明专利]一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，尤其涉及一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法。

背景技术

去甲基金霉素，别名地美环素、去甲基氯四环素、DMCT。本品抗菌谱与金霉素相似，其特点是作用比四环素、土霉素强，比金霉素稳定。临床用于肺炎、尿路感染、淋病、细菌性痢疾、布氏杆菌病及小儿猩红热等。

去甲基金霉素抗菌活性较四环素强，吸收较好。是广谱抗生素，起抑菌作用。其抗菌谱包括许多革兰阳性和阴性菌、立克次体、支原体、衣原体、放线菌等。现主要用于立克次体病、布氏杆菌病、淋巴肉芽肿、支原体肺炎、螺旋体病、衣原体病，也可用于敏感的革兰阳性球菌或革兰阴性杆菌所引起的轻症感染。

去甲基金霉素的结构如下：

目前去甲基金霉素发酵液的检测方法使用的是分光光度法进行检测，加入一定的三氯化铁显色剂后进行测定，在检测过程中处理麻烦，并且显色时间长，三氯化铁本身性质不稳定。因此开发一种能够快速、准确测定去甲基金霉素发酵液效价的方法一直是有待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种方法简便、快速，易于操作，结果准确，重复性好的去甲基金霉素发酵液效价的检测方法。

一种去甲基金霉素发酵液效价的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液供试品进行检测，然后采用外标法计算其效价。

所述高效液相色谱法的色谱仪条件为：

色谱柱：C18柱；

检测器：DAD检测器；

流动相：乙腈：0.5 %磷酸溶液＝20-30：80-70；

流速：0.80-1.20 ml/min；

进样量：10-20 ul；

检测波长：250-260 nm。

所述C18柱的规格为：长度250 mm或150 mm，内径4.6 mm，填料粒径5 um。

所述去甲基金霉素发酵液先用0.15 mol/L盐酸溶液溶解后再配制成供试品。

所述用盐酸溶液溶解后的甲基金霉素发酵液效价在10-200 u/ml。

本发明采用高效液相色谱法对去甲基金霉素发酵液效价进行检测，其方法简便、快速，易于操作，结果准确，重复性好，灵敏度高，当甲基金霉素发酵液效价在10-200 u/ml之间时，均有较好的线性关系，其线性相关系数为0.9991。

附图说明

图1为去甲基金霉素发酵液效价对照品的HPLC检测图谱；

图2为去甲基金霉素发酵液效价的HPLC检测图谱；

图3为去甲基金霉素发酵液效价的线性关系图与回归方程。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好的理解发明的技术方案，下面结合具体实施方法对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。

实施例1

去甲基金霉素发酵液分析样品的制备：

标准品溶液的制备：称取去甲基金霉素发酵液效价对照品10 mg，精密称定，置100 ml容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀。用注射器取溶液经0.45um的有机滤头过滤，得对照品溶液。

供试品溶液的制备：称取去甲基金霉素发酵液1.0 g，精密称定，置于100 ml容量瓶中，加0.15 mol/L的盐酸溶液适量，溶解后定容至刻度，摇匀，放置10 min后，过滤，初滤液弃去。用1ml注射器取溶液经0.45 um的有机滤头过滤，得供试品溶液；

标准品溶液和供试品溶液各制得5份。

色谱分析条件：岛津LC-20A液相色谱仪，Waters C18色谱柱（250*4.6,5 um）；流动相：乙腈：0.5 %磷酸溶液＝（20:80），流速：1.0 ml/min；进样量：20 ul；检测波长：254 nm。柱温箱35 ℃。

按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积为2834815，RSD为0.12%；供试品溶液的5个样品所得峰面积平均值为3898300，RSD为0.07%。

根据公式：

去甲基金霉素发酵液效价：a=A样*C标/A标M样*n

A样: 发酵液样品的峰面积；

A标: 标准品的峰面积；

C标: 标准品的效价（u/ml）；

M样: 发酵液的质量（g）；

n: 发酵液的稀释倍数。

采用外标法将标准品和供试品平均代入即可得供试品去甲基金霉素的效价为11806 u/g。