[发明专利]酵母表达的柯萨奇病毒A6病毒样颗粒及其应用

说明书

本发明提供了酵母表达的柯萨奇病毒A6病毒样颗粒及其应用，具体地，本发明提供一种制备柯萨奇A6病毒样颗粒的方法，该方法中使用经密码子优化了的柯萨奇A6病毒P1蛋白和3CD蛋白编码序列，在酵母细胞中表达，能够自动组装形成VLP，且表达量高，易于纯化，纯化获得VLP具有较强的免疫原性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及酵母表达的柯萨奇病毒A6病毒样颗粒及其应用。

背景技术

手足口病是一种接触性传播疾病，广泛流行于亚太平洋地区。主要感染五岁以下儿童引起发热，手、足、口和臀部疱疹，以及咳嗽等症状，少数患儿可在短期内出现严重神经症状和心肺系统并发症，甚至死亡。但是，目前还没有针对手足口病的可用疫苗。

自2008年，肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒16型(CA16)因其广泛传播流行成为手足口病的两个主要病原，疫苗的研究开发也多针对该两种病毒。然而，最近几年，关于柯萨奇CA6引起的手足口病全球流行，尤其是亚洲和欧洲地区流行的报道不断增多，吸引了广泛的关注。柯萨奇CA6病毒感染可以引起发热、疱疹等典型手足口病症状，同时伴有疱疹爆发处溃疡、结痂以及脱甲等非典型手足口病症状，并且不仅可感染幼年儿童也可对成年人造成严重伤害。最近有研究报道揭示柯萨奇CA6病毒颗粒的衣壳蛋白组成，并证明非结构蛋白区域(2A-3D)的变化是导致该病毒感染引起非典型手足口病症状的重要原因。

以中国某些省市的临床研究报告为例，2013年，广东省60.3％的手足口病爆发是由于柯萨奇CA6病毒感染引起，吉林长春爆发的手足口病案例中66.9％也由该病毒导致。这些临床研究报告显示了柯萨奇CA6的流行越来越广泛，逐渐成为手足口病爆发的主要病原之一，而且，免疫了EV71或CA16疫苗的人群仍然可以被柯萨奇CA6病毒感染，所以针对柯萨奇CA6的疫苗开发十分必要，也能为以后双价或多价疫苗的研究和发展作铺垫。

因此，为了有效地、有针对性地预防柯萨奇CA6感染，本领域迫切需要开发针对柯萨奇CA6的疫苗及其应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用酵母表达的柯萨奇病毒A6病毒样颗粒、其制备方法及其应用。

本发明的第一方面，提供了一种分离的经密码子优化的多核苷酸，所述多核苷酸编码柯萨奇A6病毒P1蛋白；并且所述多核苷酸选自下组：

(a)序列如SEQ ID NO.3所示的多核苷酸；

(b)核苷酸序列与SEQ ID NO.3所示序列的同源性≥95％(较佳地≥98％)的多核苷酸；

(c)与(a)-(c)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。

本发明的第二方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有本发明第一方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述表达载体还包括编码柯萨奇A6病毒3CD蛋白的多核苷酸序列。

在另一优选例中，所述表达载体包括第一表达盒和第二表达盒，所述第一表达盒包括SEQ ID NO.3所示的多核苷酸或其互补序列；所述第二表达盒包括SEQ ID NO.8所示的多核苷酸或其互补序列。

在另一优选例中，所述表达载体为重组杆状病毒。

在另一优选例中，所述第一表达盒还包括启动子，所述启动子位于SEQ ID NO.3所示的多核苷酸的上游，优选地所述启动子为PAOX1启动子。

在另一优选例中，所述第二表达盒还包括启动子，所述启动子位于SEQ ID NO.8所示的多核苷酸的上游，优选地所述启动子为PAOX1启动子。

本发明的第三方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有本发明第二方面所述的表达载体，或者在基因组中整合有本发明第一方面所述的多核苷酸。