[发明专利]一种糖肽类抗生素达巴万星中间体A40926的纯化制备方法

说明书

本发明涉及一种糖肽类抗生素达巴万星中间体A40926的纯化制备方法，A40926发酵液经碱化、陶瓷膜过滤、聚酰胺层析、等电点沉淀、复溶及凝胶层析后，获得高纯度A40926。所述方法最大限度地提高了A40926的生产效率，纯度达到95％以上，收率达到65％以上，从而实现高纯度A40926的产业化。

技术领域

本发明属于生物分离技术领域，具体涉及一种糖肽类抗生素达巴万星中间体A40926的纯化制备方法。

背景技术

达巴万星(Dalbavancin)是一种继万古霉素和替考拉宁之后的第二代具有抗多重耐药菌的半合成糖肽类抗生素，目前已进入III期临床试验。达巴万星具有和替考拉宁相似的分子结构，但羧基肽基团末端的酰胺基修饰提高了达巴万星对葡萄球菌属，特别是凝固酶阴性葡萄球菌的抗菌活性；而亲脂支链和二聚体的形成提高了达巴万星的组织穿透性和与细菌细胞膜的亲和力。与万古霉素及替考拉宁相比，达巴万星具有更广谱、更强的抗菌活性，对多种革兰氏阳性菌均具有良好的抗菌性。由于达巴万星具有抗菌谱宽、耐受性好、半衰期长、副作用小等优点，为临床治疗革兰氏阳性菌感染提供了新的选择，具有诱人的开发前景。

达巴万星合成前体A40926是由野野村放线菌(Nonomuraea sp.)ATCC39727产生的天然糖肽类抗生素，主要由PA、PB、A、B0和B1组成。目前，达巴万星合成前体A40926相关研究和生产刚刚起步，同时由于微生物发酵产物成分复杂，目标产物浓度较低，在加上A40926结构复杂，稳定性差等特点，因此，制备高纯度A40926难度较大，成为达巴万星制备工艺的关键所在。

中国发明专利申请CN101851277A公开了一种道古霉素关键中间体A40926 B0组分的纯化制备方法，该方法包括：1、将A40926 B0组分粗品进行凝胶层析、大孔吸附分离以得到A40926 B0组分的半纯品；2、将A40926 B0半纯品进行反相柱层析，减压浓缩，可得高浓度A40926 B0组分，色谱纯度大于97％。但该制备方法工艺路线较为复杂、成本较高，不利于生产化的要求，因此，A40926发酵产物的工业纯化问题亟待解决。

发明内容

本发明的主要目的是为了解决达巴万星中间体A40926分离纯化问题，并提供高纯度的A40926用于制备达巴万星。

为了达到上述目的，本发明提供了一种高纯度达巴万星中间体A40926的制备方法，所述方法包括：

步骤一、A40926发酵液经碱化、陶瓷膜过滤、顶洗，得滤液；

步骤二、滤液通过聚酰胺层析，洗涤液阶梯式洗涤，解析剂解析，得解析液；

步骤三、解析液通过等电点沉淀、复溶及凝胶层析，获得高纯度的A40926。

本发明对步骤一碱化所用的碱进行了优选，优选地，上述步骤一碱化所用的碱为0.05～0.3mol/L氢氧化钠、0.05～0.3mol/L氢氧化钾和1～5％氨水中的一种，更优选的是，上述步骤一碱化所用的碱为0.25mol/L的氢氧化钠溶液。

本发明对步骤一碱化反应时间进行了优选，优选地，上述步骤一碱化时需要搅拌1～3hr。

本发明对步骤一碱化反应温度进行了优选，优选地，上述步骤一碱化时温度需控制在10～40℃，更优选的是，上述步骤一碱化温度为20～30℃。

本发明对步骤一陶瓷膜过滤进行了优选，优选地，上述步骤一陶瓷膜过滤时温度为10～40℃，采用孔径为20～50nm的陶瓷膜，更优选的是，上述步骤一陶瓷膜过滤时温度为20～30℃，采用孔径为50nm的陶瓷膜。

本发明对步骤一洗涤进行了优选，优选地，上述步骤一碱化、过滤后所得滤渣采用pH＝8.0～12.0的纯化水顶洗，更优选的是，上述步骤一碱化、过滤后所得滤渣采用pH＝11.0的纯化水顶洗。