[发明专利]一种抗细胞质胸苷激酶‑IgG抗体在审
申请号: | 201610318833.1 | 申请日: | 2016-05-12 |
公开(公告)号: | CN107365753A | 公开(公告)日: | 2017-11-21 |
发明(设计)人: | 杨国民;王业启;汤蔚莉;王滟 | 申请(专利权)人: | 杨国民 |
主分类号: | C12N9/12 | 分类号: | C12N9/12;C07K16/40;G01N33/574;G01N33/573 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 细胞质 激酶 igg 抗体 | ||
技术领域
本发明涉及一种抗体的制备方法和用途,具体涉及一种抗细胞质胸苷激酶-IgG抗体的制备方法和用途。
背景技术
本发明涉及用用人的TK1全长重组蛋白作为抗原, 制备抗细胞质胸苷激酶-IgG抗体和以IgG抗体为有效成分的肿瘤诊断试剂盒。
癌症是一种细胞异常增殖疾病。当正常细胞生长调控失控,导致细胞恶性增殖,是导致人类死亡的杀手。死亡人数每年在增加。尽管近年来化疗,手术,放疗和内分泌治疗等,已经有了很大的进步,但远远不可能达到肿瘤的根治,并有复发和转移的可能。因此,早期的发现和早期的治疗将给予患者康复最佳的福音。
现在国内已有数十种肿瘤标记物如AFP(甲胎蛋白)、CEA(癌胚抗原)、HCG(绒毛膜促性腺激素)、PSA(前列腺特别抗原)、VCA(喉癌抗原)、CA(癌抗原)等,但这些肿瘤标记物或受限于个别器官,或灵敏度低。临床应用证实现有一系列单克隆抗体,如CEA,CA19-9,CA125,CA15-3,由于其特异性不理想,在临床上应用仍有争议。用来检测肠癌的CA19-9、乳腺癌的CA-15-3,由于其监控治疗效果的不理想,2002年美国临床肿瘤协会已不推荐使用。肿瘤特别是恶性肿瘤的早期诊断中,肿瘤标记物的检测已成为临床诊断的重要手段,在体检及临床中的恶性增殖病变筛查和治疗后的跟踪监测等具有广泛的使用价值。
胸苷激酶(TK)的酶学命名为腺苷三磷酸:胸苷5,-磷酸转移酶,EC.2.7.1.21, 简称胸苷激酶TK,是一种嘧啶补救途径的激酶,在ATP 为供体和镁离子参与的条件下,催化脱氧胸苷为一腺胸苷酸。人细胞中TK 以两种同功酶的形式出现,即TK1(位在于染色体17q23.2–q25.3)和TK2(位于染色体16q22–q23.1)。存TK1在于细胞质中,与细胞的分裂相关,称为细胞质胸苷激酶 ;TK2 存在于线粒体中,其表达与细胞周期无关,称为线粒体胸苷激酶。TK1 的水平升降与DNA 在细胞周期的S 期DNA 合成速度密切相关,正常增殖细胞TK1 的水平在细胞周期的G1 和S 期交界处开始升高,随着细胞进入G1 晚期, TK1 酶的水平逐渐急剧上升, 直至S 和G2期交界处。因此,TK1 酶被称为一种嘧啶补救合成的DNA 的关键酶和S-期特殊酶。TK2 则仅能在静止期细胞中见到,在增殖细胞中水平非常低。70 年代以来,TK 酶的研究引起了广泛的关注,特别是TK1 与细胞增殖的密切相关特征,即非增殖细胞的TK1 和健康人血清和组织中TK1,其含量极微或检测不到; 但在恶性肿瘤患者中,TK1 酶伴随着肿瘤细胞数的急剧增殖而升高。因此,TK1 可以作为一种好的血清学细胞增殖标志来检测增殖细胞的增殖活性,特别适用于恶性肿瘤的细胞增殖度检测。目前,已有利用胸苷类似物,[125I]-5-碘- 2´脱氧尿苷作为底物,检测血清TK1(STK)的放射性同位素方法的试剂盒(TK-REA-kit-[125I]-radio-assay)出售,此方法主要是采用TK 活性检测实体肿瘤细胞增殖度。但放射性同位素[125I]-5-碘–2´-脱氧尿苷并非是TK1 活性分析的专一性底物,它的半衰期仅在4 星期,并且在血清TK 的活性测定中,对pH 和温度非常敏感,常产生不准确结果;并且需要使用贵重的检测仪器((γ闪烁仪)。这种检测具有放射性污染且需要特别的设备和熟练技术人员操作,因此在临床应用上有很大的局限性。且已有研究显示TK1活性检测方法并不适用于实体癌患者的监测和预后。
制备抗细胞质胸苷激酶-IgG抗体在国内尚未有报道。采用双抗体夹心法检测血清中TK1,应用于体检及临床中的恶性增殖病变筛查和治疗后的跟踪监测,目前在国内外尚属首创。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种抗细胞质胸苷激酶-IgG抗体,以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。
本发明设计用人的TK1的全长重组蛋白作为抗原,制备抗细胞质胸苷激酶-IgG抗体以及用上述抗体制备的试剂盒在肿瘤诊断中的应用。
本发明所需要解决的技术问题,可以通过以下技术方案来实现:
一种蛋白,其特征在于,所述蛋白是细胞质胸苷激酶TK1,其的全长氨基酸序列与SEQ ID NO.1相同,
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