[发明专利]一种大批量培养高纯度莱氏野村菌酵母型细胞的方法

权利要求书

1.一种大批量培养高纯度莱氏野村菌酵母型细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：

①将麦芽糖，蛋白胨和酵母膏加入到蒸馏水中溶解，然后加入琼脂粉搅拌均匀，加入hepes调节pH至7.5，得到混合液，将所得混合液在121℃下灭菌25分钟，然后均匀倒在平板上至2.5毫米的厚度，冷却后得到培养基；所述麦芽糖、蛋白胨、酵母膏、琼脂粉和蒸馏水的重量体积比为4g：1g：1g：1g：93ml；

②用灭菌的接种器蘸取莱氏野村菌分生孢子，置于步骤①得到的培养基表面上方5~7厘米处，敲击接种器，将莱氏野村菌分生孢子均匀撒在步骤①得到的培养基上，得到莱氏野村菌分生孢子接种的培养基，所述莱氏野村菌分生孢子接种培养基的分布密度为2个/cm²；所述接种器为接种环、接种针或玻璃棒；

③将步骤②所得莱氏野村菌分生孢子接种的培养基置于温度26℃，湿度为80%的光照环境中，96小时后在培养基表面得到半透明液滴状的莱氏野村菌酵母型细胞；

④用灭菌的工具刮取步骤③所得的莱氏野村菌酵母型细胞至步骤①所得的培养基表面，用涂布器涂布均匀，置于温度24~30℃，湿度为75~90%的光照环境中，24~36小时后得到7~15倍接种量的高纯度莱氏野村菌酵母型细胞；所述涂布器为不锈钢筷子或顶端烧圆的玻璃棒；所述工具为方嘴平头镊子。

2.根据权利要求1所述的大批量培养高纯度莱氏野村菌酵母型细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：

①将麦芽糖，蛋白胨和酵母膏加入到蒸馏水中溶解，然后加入琼脂粉搅拌均匀，加入hepes调节pH至7.5，得到混合液，将所得混合液在121℃下灭菌25分钟，然后均匀倒在平板上至2.5毫米的厚度，冷却后得到培养基；所述麦芽糖、蛋白胨、酵母膏、琼脂粉和蒸馏水的重量体积比为4g：1g：1g：1g：93ml；

②用灭菌的接种环蘸取莱氏野村菌分生孢子，置于步骤①得到的培养基表面上方6厘米处，敲击接种环，将莱氏野村菌分生孢子撒在步骤①得到的培养基上，得到莱氏野村菌分生孢子接种的培养基，所述莱氏野村菌分生孢子接种培养基的分布密度为2个/cm²；

③将步骤②所得莱氏野村菌分生孢子接种的培养基置于温度26℃，湿度为80%的光照环境中，96小时后在培养基表面得到半透明液滴状的莱氏野村菌酵母型细胞；

④用灭菌的方嘴平头镊子刮取步骤③所得的莱氏野村菌酵母型细胞至步骤①所得的培养基表面，用不锈钢筷子涂布均匀，置于温度26℃，湿度为80%的光照环境中，24小时后得到15倍接种量的高纯度莱氏野村菌酵母型细胞。