[发明专利]水翁酸及其制备方法和在抗肿瘤、抗炎药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于天然药物领域，具体涉及一种新的taraxastane型五环三萜酸-水翁酸及其制备方法和在抗肿瘤、抗炎药物中的用途。

背景技术：

中国的癌症发病率和死亡率在持续增长，已然成为我国人口死亡的主要原因之一，对公众生命、健康造成了重大的威胁。据国家癌症预防与控制中心统计和估算，2015年我国将有400多万新增癌症病历，平均每天约1万2千人被诊断患有癌症。另外，约280万人将因癌症而死亡，平均每天7500人。随着现代医学与药物化学的快速进步与发展，许多类型的癌症可以被提前预防、及时诊断，或者通过手术、放射治疗、化学药物治疗等方法延长病人寿命甚至得到治愈。然而，这些癌症疗法往往受限于癌症的类型、分布以及阶段等因素。另外，在长期接受化学药物治疗后癌细胞会发生基因突变，对现有药物产生耐药性，而且化疗药物所引起的不良副作用也严重影响着癌症患者的生活质量。因此，不断寻找并开发出高效、低毒、少副作用的新型抗肿瘤药物分子一直是我们战胜癌症、追求健康的重要途径。

炎症是人体组织、细胞在应对有害刺激时(如外伤、病原微生物感染或外来刺激物)所产生的一系列生理反应，常见的表现有疼痛、发热、以及红肿。机体产生炎症反应的目的是为了消除这些有害刺激、清除坏死的细胞、并修复受损的组织。然而，长期和不受调控的炎症反应会对人体组织造成伤害，从而导致疾病。牙周炎、动脉粥状硬化、类风湿性关节炎等正是由慢性炎症反应所引起的。在长期炎症反应刺激下的组织免疫细胞会持续产生过量的炎症因子，如细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6，趋化因子IL-8，可溶性气体NO，以及酶等，这些炎症因子会反过来维持并发展炎症反应。因此，一些能够下调或抑制这些炎症因子表达的药物，如地塞米松等，常被用于治疗由慢性炎症反应所引起的疾病。但是，目前临床上使用的抗炎药物对某些病人并不起效。另外，长期服用这些药物会引起一些不良反应，如失眠、呕吐、头痛、高血压等。因此，有必要寻找新的抗炎活性物质，为新型抗炎药物的研发提供先导化合物。

近100年来，植物和微生物次生代谢产物为现代药物研发提供了大量结构类型多样、生物活性优秀的药物实体和先导化合物，最具代表性的有青霉素、青蒿素、紫杉醇、长春新碱等等。我国华南地区地理位置与生态环境得天独厚，拥有着丰富多样的植物物种与资源，是发掘药物先导化合物的宝库。水翁(Cleistocalyx operculatus(Roxb.)Merr.et Perry)又名水雍或水榕，系桃金娘科水翁属常绿乔木，在华南地区广泛分布。其花蕾和叶片不仅具有独特的香味，而且具备清热、散毒、消滞的功效，长期以来被民间用来制备清热凉茶和防治伤风、感冒。其中，关于水翁花蕾的化学成分及现代药理活性研究较多，但对水翁叶中活性次生代谢产物的研究涉及较少且不深入，目前未见有关水翁叶中具抗肿瘤和抗炎活性五环三萜酸成分的研究报道。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种新的、来源于水翁(Cleistocalyx operculatus(Roxb.)Merr.et Perry)叶的taraxastane型五环三萜酸-水翁酸或其药学上可接受的盐或其酯化衍生物。

本发明的水翁酸或其药学上可接受的盐或其酯化衍生物，所述的水翁酸其结构如如式(1)所示：

本发明的第二个目的在于提供式(1)所示的水翁酸的制备方法，其特征在于，水翁酸是从水翁(Cleistocalyx operculatus(Roxb.)Merr.et Perry)叶中制备分离得到的。具体材料可以是干品或鲜品。

具体步骤优选为：

a、制备总浸膏：将水翁的叶粉碎后用有机溶剂-水的混合溶液浸提，提取液浓缩除去有机溶剂后得到混悬液，混悬液用乙酸乙酯萃取，萃取液经减压浓缩后得到总浸膏；

b、分离纯化：总浸膏经正相硅胶柱层析，以体积比为98:2、95:5的氯仿/甲醇梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比95:5洗脱的馏分，浓缩至干后，以甲醇为溶剂重结晶得到水翁酸。

所述的有机溶剂-水的混合溶优选为体积分数90％的乙醇水溶液。

本发明的第三个目的是提供水翁叶在制备水翁酸中的应用。

本发明式(1)所示的水翁酸经体外肿瘤细胞生长抑制实验证实，其对人乳腺癌MCF-7细胞、人胃癌NCI-N87细胞以及人肝癌HepG2细胞均有显著生长抑制作用，半数抑制浓度(IC₅₀值)分别为4.90±0.52、6.54±1.33和3.23±0.49μM，说明其具有优秀的抗肿瘤活性。