[发明专利]凤凰单丛茶树内生拮抗假单胞菌ZF02及在生防中应用

说明书

本发明公开一种凤凰单丛茶树内生拮抗假单胞菌ZF02及在生防中应用，通过从凤凰单丛茶树茎中取样，分离纯化、筛选和培养，获得一株有较高生防效果的假单胞菌(Pseudomonas sp.)ZF02 GDMCC No：60013，菌种在生理生化特性和分子水平方面与常见的假单胞菌具有明显的差异，是一种典型的新菌种，菌株ZF02对梨果黑斑病菌、梨腐烂病菌、立枯丝核菌和瓜果腐霉有较高抑制效果，菌丝生长抑制率分别为为73.13％，35.75％，61.42％和15.50％，是一种典型性突出、专一性强的生防菌，无论开发新的生物农药或者生物防治菌剂，该菌都具有很好的应用前景，在生防中具有广泛的应用价值。

技术领域

本发明涉及农业生物生防技术领域，具体涉及一种从凤凰单丛茶树内生拮抗菌及其在生物防治中应用的技术领域。

背景技术

植物内生菌(Endophyte)是指一类在其部分或全部生活史中存活于健康植物各种组织内部或细胞间隙，而不使宿主产生明显病理症状的微生物。拮抗内生菌是指能够产生拮抗作用的微生物。植物体是一个复杂的微生态系统，健康植物体内含有大量的内生细菌(Endophytic Bacteria)，已从小麦、棉花、水稻、花生、马铃薯、番茄、柠檬、柑桔等50多种植物体内分离鉴定出内生细菌50多个属，几乎所有健康植物体内均含有内生细菌。

在农业种植业中，梨、核桃、红枣、棉花等农作物遭受梨果黑斑病菌、核桃叶枯病菌、梨腐烂病菌、红枣黑斑病菌、立枯丝核病菌等的侵害严重，化学杀菌剂是控制以上病害常用的方法，但化学杀菌剂污染环境，诱导病菌产生抗药性，破坏生态平衡，它的残留问题令人担忧，因此植物病害的生物防治研究越来越受到重视。

目前植物病害的生物防治是利用有益微生物和微生物代谢产物对农作物病害进行有效防治的技术与方法。单丛茶是我国重要的茶树品种，从单丛茶树内生细菌中筛选出对农林作物病原菌有抑菌作用的拮抗菌株，对开发生物防腐剂及抑菌剂，保障食品和环境安全具有重要的意义。

国外已有报道从不同的植物中分离出Acinetobacter、Agrobacterium、Alcaligenes、Bacillus、Clavibacter、Enterobacter、Erwinia、Klebsiella、Phyllobacterium、Pseudomonas和Serratia等属的内生细菌。国内黄晓琴，张丽霞等从茶树内生菌中进行了冰核细菌拮抗菌的筛选，得到菌株Y1，通过对其进行形态学观察、生理生化指标测定及16SrDNA序列测定，鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。罗明对新疆棉花植株组织中的内生细菌进行分离，共得到102个菌株，初步鉴定分属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、黄单孢菌属(Xanthomonas sp.)、假单孢菌属(Pseudomonas sp.)、欧文氏菌属(Erwinia sp.)及短小杆菌属(Curtobacterium sp.)，从中筛选出对棉花枯萎病菌有体外拮抗活性的菌株22个，对立枯丝核菌有体外拮抗活性的菌株15株。

生物防治不仅可降低对环境的影响，还不易产生抗药性。假单胞菌营养要求简单，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，可研究其用于植物病害的生物防治，为研究开发生物防控菌杀菌剂奠定基础。

凤凰单丛茶产于潮州市凤凰山，素以滋味浓醇鲜爽，香气似天然花果香著称，种植历史悠久，种质资源丰富，已达80多个品系。目前对凤凰单丛茶的研究主要集中在品种鉴定、遗传多样性分析、品质化学特性、生理活性、质量安全和做青工艺的研究，对于凤凰单丛茶树内生菌的研究不多。因此对凤凰单丛茶树内生菌进行分离，从中筛选出具有抑菌活性的拮抗菌株都具有重要的意义。

发明内容