[发明专利]一种芒果花诱导愈伤组织的方法

说明书

【技术领域】

本发明属于植物组织培养领域，涉及一种芒果花诱导愈伤组织的方法。

【技术背景】

芒果(mangifera indica)属于漆树科(anacardiaceae)芒果属(meagifera)，是热带优质水果之一，是世界第二大热带水果。芒果肉质细嫩，风味浓郁，营养丰富，具有十二种必需氨基酸，维生素A和C、胡萝卜素等含量较高。食用芒果具有抗癌、美化肌肤、防止高血压、动脉硬化、防止便秘、止咳、清肠胃的功效，是消费者非常喜爱的热带亚热带著名水果，素有“热带果王”之美誉。中国是仅次于印度的第二大芒果生产国，芒果栽培地区主要分布于海南、广西、广东、云南和四川的金沙江干热河谷区域，广西百色市则以盛产芒果而闻名，具有很高的经济价值和社会价值。

芒果是基因高度杂合的木本植物，种子的存活期不长，用传统的育种方法改良芒果较困难。因此建立成熟的芒果离体培养再生植株技术体系有利于芒果优良品种性状得到大量繁殖，并且有利于芒果种质资源的搜集和保存。但目前芒果的离体培育技术仍较薄弱，已有采用芒果茎段诱导培养无菌芽的相关研究，但仍未见采用芒果花诱导培养愈伤组织的相关研究和报道。

【发明内容】

鉴于以上内容，本发明提供了一种芒果花诱导愈伤组织的方法，该方法是经过大量实验研究得出的，其利用芒果花苞作为外植体进行组织培养，摸索并筛选出了最适宜芒果花诱导培养愈伤组织的培养基和培养条件，实现了芒果花诱导培养愈伤组织，得到无菌体系的作用，且愈伤组织诱导率高，获得的愈伤组织的器官分化率高，可进行规模化、工业化生产。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种芒果花诱导愈伤组织的方法，所述方法包括以下步骤：

1)外植体的剪取：剪取新长且花未开的芒果花穗；

2)预处理：用流水将步骤1)剪取的芒果花穗冲洗干净，而后用多菌灵溶液进行表面消毒，再用流水冲洗；

3)灭菌：将经步骤2)处理后的芒果花穗置于无菌超净工作台上，用HgCl₂溶液浸泡灭菌，再用无菌水冲洗，得无菌芒果花穗；

4)接种、培养：在无菌超净工作台上将步骤3)的无菌芒果花穗上的花苞剪下，将单个花苞接种到培养基上进行愈伤组织培养，获得芒果愈伤组织；其中，所述培养基为1/2MS+1.0～5.0mg/L 2,4-D+30～120mg/L PVP，pH为5.8。

进一步地，在步骤2)中，所述多菌灵溶液的质量浓度为0.1％～0.5％。

进一步地，所述步骤2)的预处理过程包括：用流水冲洗步骤1)所剪取的芒果花穗5min，而后用多菌灵溶液浸泡10～15min，再用流水冲洗10min。

进一步地，在步骤3)中，所述HgCl₂溶液的质量浓度为0.1％～0.2％。

进一步地，所述步骤3)的灭菌过程包括：将经步骤2)处理后的芒果花穗放在无菌超净工作台上，用HgCl₂溶液浸泡灭菌5～10min，而后采用无菌水冲洗5次，每次1～2min。

进一步地，在步骤4)中，所述培养基为1/2MS+3.0mg/L 2,4-D+70mg/L PVP，pH为5.8。

进一步地，在步骤4)中，所述愈伤组织培养为在温度为26～28℃、湿度为70％的恒温恒湿条件下暗培养。

本发明提供了一种芒果花诱导愈伤组织的方法，相对于现有技术，本发明的有益效果是：

本发明通过采用芒果花诱导愈伤组织的方法培育获得芒果再生组织。其利用芒果花苞作为外植体进行组织培养，相对于已经开放的芒果花，愈伤组织的分化能力更强，分化率更高，且未开放的花苞对消毒剂更敏感，剪取外植体后，先用一定浓度的多菌灵溶液作为消毒剂进行消毒，再采用一定浓度的HgCl₂溶液进行灭菌，消毒剂和灭菌剂的种类和浓度均根据芒果花的特性进行选择，同时消毒和灭菌时间严格控制，一方面可保证外植体消毒和灭菌充分，另一方面确保外植体的组织结构不被破坏，消毒和灭菌效果好，为下一步处理做好充足准备；然后，根据培养对象的营养要求，通过研究摸索筛选出适宜芒果花诱导愈伤组织的培养基的种类和浓度，并严格控制培养的温度和湿度，在本发明培养条件下进行诱导培育，愈伤组织形成快(相对于温度在26℃以下，或28℃以上，愈伤组织形成时间可以缩短2-3天)，诱导率高，且愈伤组织的活力高，器官分化率高。