[发明专利]CIK细胞及其培养方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的涉及一种CIK细胞及其培养方法和其应用。

背景技术

恶性肿瘤是当前危害人类健康的主要疾病之一，在传染病得到控制的国家，心脑血管疾病和恶性肿瘤已分别成为死亡原因的第一和第二位。2005年统计，我国城市居民死亡第一位是恶性肿瘤，是农村居民的第二位死因。

肿瘤的传统疗法包括手术、化疗和放疗。但是这些疗法都具有局限性：手术常因癌细胞浸润到邻近或转移到远端组织而不能根除；化疗、放疗则受限于对体内其他正常组织的毒性及伤害。近年来流行的靶向疗法可在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡。但是，分子靶向药物只能对特定基因突变型肿瘤产生作用，假如靶点肿瘤基因突变就会产生药物耐受性，导致疗效下降，甚至发生严重的不良反应等问题。

随着人们对肿瘤发生发展机制的深入研究，及肿瘤免疫学、分子生物学、生物工程技术的发展，肿瘤的生物治疗迅速发展，成为肿瘤治疗的第四种治疗模式。生物治疗具有较强的针对性、特异性、有效性，对正常造血及免疫系统、主要器官无负面影响和明显毒性，被认为是本世纪肿瘤综合治疗模式中最活跃、最有前途的治疗手段。生物治疗可以单独使用，也可以与现代手术、化疗和放疗方法联合应用，具有很强的互补作用，不但具有清除体内不同部位的肿瘤细胞，防止肿瘤复发与转移的作用，而且对病人受损的免疫系统又能起到恢复与重建的独特作用。

CIK(Cytokine-induced Killer Cell，细胞因子诱导的杀伤细胞)：是将人体外周血单个核细胞(PBMC)在体外用多种细胞因子培养增殖诱导后获得的一群异质细胞，CD3⁺、CD56⁺双阳性细胞是CIK细胞中主要的效应细胞，因CD3⁺是T细胞的标志，CD56⁺是NK细胞的标志，所以又被称为NK细胞样T淋巴细胞，该细胞兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性的广谱杀瘤、抗病毒活性。

虽然CIK细胞治疗方案具有许多优点，但是当前CIK细胞存在毒性不理想，其培养存在扩增倍数不足，成本较高等技术问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种CIK细胞及其培养方法，以解决现有CIK细胞存在毒性不理想，其培养存在扩增倍数不足，成本较高等技术问题。

本发明另一目的在于提供一种细胞治疗肿瘤药物，以克服现有其他细胞治疗药物存在毒性不理想而导致治疗肿瘤效果不理想，费用高的技术问题。

为了实现上述发明目的，作为本发明的一个方面，提供了一种CIK细胞培养方法。所述CIK细胞培养方法包括如下步骤：

采集患者的外周血单个核细胞；

将所述单个核细胞与抗CD3抗体、抗CD28抗体和细胞因子加入无血清培养基中进行诱导培养。

作为本发明的另一方面，提供了一种CIK细胞。所述CIK细胞是采用本发明CIK细胞培养方法培养获得。

作为本发明的再一方面，提供了一种细胞治疗肿瘤药物。所述细胞治疗肿瘤药物包含有有效剂量的本发明CIK细胞。

与现有技术相比，本发明CIK细胞培养方法具有以下优点：

1.将抗CD3/CD28抗体联合用于T淋巴细胞的体外激活，抗CD28单抗能提供有效的共刺激信号，激发T细胞增殖，在抗CD28抗体的协同作用下，抗CD3抗体的刺激活性明显提高；

2.增加基因重组人细胞因子IL-2和IL-21联合诱导CIK细胞，细胞因子的联合应用对淋巴细胞的扩增产生协同作用，比使用单一细胞因子诱导细胞的大幅提高细胞增殖倍数，在抗CD3/CD28抗体联合作用下，提高CIK细胞的杀伤活性，且减少了因大剂量单因子应用所产生的毒副作用；

3.缩短了培养时间，极大的保持了效应细胞的活性和增殖能力，降低培养成本；

4.全程采用无血清培养基，有效避免了任何可能的外源性感染，纯度高。

本发明CIK细胞由于本发明培养方法培养获得，本发明细胞治疗肿瘤药物含有本发明CIK细胞，因此，本发明CIK细胞具有纯度高、对肿瘤杀伤活性强，且使用安全，本发明细胞治疗肿瘤药物具有明显的抗肿瘤作用，安全且成本低。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的CIK细胞流式细胞术分析图；其中，图1a为CD3+CD56+双阳性细胞流式细胞术分析图；图1b为CD3+CD8+细胞流式细胞术分析图；