[发明专利]一种治疗奶牛脂肪肝的半乳糖羧甲基壳聚糖载还原型谷胱甘肽肝靶向传递系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种用作奶牛脂肪肝的半乳糖羧甲基壳聚糖载还原型谷胱甘肽肝靶向给药系统。

背景技术

脂肪肝是奶牛围产期重要的代谢疾病，以肝脏吸收的脂质数量超过氧化和分泌的数量为特征，前期征兆为脂肪组织动员引起的血浆NEFA(非酯脂肪酸)水平升高。过量的脂质以甘油三酯形式在肝脏中沉积导致肝脏代谢功能下降。脂肪肝严重影响奶牛健康，导致奶牛围产期疾病发病率升高，引起产奶量下降产犊间期延长，造成严重经济损失，并产生大量的治疗费用。目前奶牛脂肪肝治疗药物种类较单一，对奶牛脂肪肝多以预防为主，针对性治疗较少开展，兽医临床亟待高效低残留制剂的面世。

发明内容

为解决如上的问题，本发明提供一种高效低毒低残留的用作奶牛脂肪肝的半乳糖羧甲基壳聚糖载还原型谷胱甘肽肝靶向给药系统。

附图说明

图1为半乳糖羧甲基壳聚糖载还原型谷胱甘肽肝靶向给药系统构建技术路线图。

图2为羧甲基壳聚糖、半乳糖基羧甲基壳聚糖红外光谱图。

图3为大鼠肝脏病理学检查结果。

具体实施方式

本发明以还原型谷胱甘肽为携载药物，半乳糖基羧甲基壳聚糖为载体材料，构建还原型谷胱甘肽半乳糖基羧甲基壳聚糖靶向给药系统，用于围产期奶牛脂肪肝病的防治。

实验通过半乳糖配基对羧甲基壳聚糖氨基的修饰赋予其主动肝靶向性；以O-羧甲基壳聚糖为原料，采用还原胺化法合成得到半乳糖羧甲基壳聚糖(LAC-CMC)，用红外对其结构进行确证。在GSH-LACMC-NP制备过程中，采用单因素法考察药物浓度和LAC-CMC浓度对包封率及粒径的影响。在电镜下对GSH-LACMC-NP外貌进行表征；以平均粒径和PDI值为指标，通过粒径分析考察其粒径分布；采用半透膜法，测定其体外释放情况；以总靶向效率和平均摄取率为指标，对其靶向性进行评价；采用HPLC法，研究其在健康小鼠体内的分布。实验选用SD雌性大鼠，高脂饮食复制NAFLD模型，实验分为健康对照组、脂肪肝病对照组和脂肪肝病给药组3组。给药组以载GSH纳米粒（GSH-LACMC-NP）干预5周，实验结束后收集血浆进行血清、肝匀浆生化等指标测定和肝脏、肾脏组织病理学检查。

1 LAC-CMC的制备与表征

1.1仪器、试剂及材料

乳糖(广东汕头西陇化工厂)；KBH₄(天津市科密欧化学试剂有限公司)；羧甲基壳聚糖(广东汕头西陇化工厂)。

Waters 高效液相色谱系统 (美国Waters 公司)；BT25S型电子天平(德国赛多利斯)；UV-2550型双光束紫外／可见分光光度计(日本岛津)；JEM-1230型透射电镜(日本JEOL公司)；NalloZS90型激光粒度散射仪(英国马尔文公司)；FT-IR红外光谱仪（Bruker Opties）；XW-80A型漩涡混合器(上海医大仪器厂)；DK-600型电热水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)；GL-21M型高速冷冻离心机(上海离心机械研究所)；RE-2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

1.2方法

向羧甲基壳聚糖溶液中加入乳糖和KBH₄水溶液适量，室温反应。反应完毕将反应液离心，将上层清液浓缩，加入适量丙酮，析出沉淀，即得半乳糖基羧甲基壳聚糖。

将羧甲基壳聚糖、半乳糖基羧甲基壳聚糖磨成细微粉末，以KBr压片，用FT-IR红外光谱仪记录红外光谱图。

1.3结果

实验通过半乳糖配基对羧甲基壳聚糖氨基的修饰赋予其主动肝靶向性：以O-羧甲基壳聚糖为原料，采用还原胺化法合成得到LAC-CMC，通过控制反应时间得到不同取代度的半乳糖基羧甲基壳聚糖，其中半乳糖基羧甲基壳聚糖的取代度通过双突跃法进行测定。以半乳糖基羧甲基壳聚糖的氨基取代度为指标，考察反应时间对其影响，最终确定反应时间为72h。在GSH-LACMC-NP制备过程中，采用单因素法考察药物浓度和LAC-CMC浓度对包封率及粒径的影响。对羧甲基壳聚糖和半乳糖基羧甲基壳聚糖红外光谱测定的分析结果验证了反应产物中半乳糖基的存在。羧甲基壳聚糖、半乳糖基羧甲基壳聚糖红外光谱图见图2。

2 GSH-LACMC-NP的制备

2.1试验材料

半乳糖基羧甲基壳聚糖(自制)；氯化钙(天津市科密欧化学试剂有限公司)；GSH（华蓝化学）。

2.2试验方法

2.2.1未载药纳米粒的制备

室温下将半乳糖羧甲基壳聚糖水溶液搅拌下加入氯化钙水溶液至出现乳光。