[发明专利]间充质干细胞来源外泌体在制备治疗子痫前期药物或者制剂中的应用

说明书

本发明公开了脐带间充质干细胞来源外泌体在治疗子痫前期制剂中的应用，具体涉及用人脐带间充质干细胞来提取其产生的外泌体用子痫前期的治疗。所述外泌体能有效改善子痫前期高血压和蛋白尿的症状，减轻肾小球肾炎症状，减少胎盘中的炎症反应，并改善胎仔发育，且这种外泌体还具有保存和运输方便的优势，这就为子痫前期等难治性炎症相关疾病的治疗提供了新的策略。

技术领域

本发明涉及间充质干细胞来源外泌体的用途，具体是间充质干细胞产生的外泌体在子痫前期治疗中的应用。

背景技术

子痫前期(preeclampsia，PE)或称为先兆子痫，是妊娠期所特有的并发症，其特征为孕妇妊娠20周后出现高血压(收缩压≥140mmHg或舒张压≥90mmHg)和蛋白尿(≥300mg/24小时或随机蛋白尿≥++)，可累及机体各器官和系统。PE发病率占全部妊娠的3％～10％，是导致孕产妇和围产儿死亡的重要原因之一，其病因仍未阐明，且临床上尚缺乏有效的预防和治疗手段。

近年来研究表明，PE是母亲对妊娠的一种过度性炎症反应，用低剂量脂多糖(LPS)可诱导大鼠和小鼠产生PE样症状。母胎界面处免疫失衡可能参与PE的发病，而且PE患者胎盘包括蜕膜、羊膜、滋养细胞来源的间充质干细胞(MSCs)的功能异常可能是PE患者母胎界面免疫失衡的重要因素之一。因此，利用正常间充质干细胞的免疫调控功能治疗PE可能是一种新的有效治疗手段。我们前期的实验已经证实，正常妊娠孕妇脐带来源的间充质干细胞静脉注射I型辅助T细胞诱导的PE小鼠模型，可改善小鼠的高血压、蛋白尿和肾小球肾炎等PE样症状，改善胎盘发育状况。

然而，间充质干细胞植入体内后存在恶性转变及致瘤的风险，而且细胞的存储和运输不方便，限制了临床应用。值得关注的是，MSCs能分泌大量的外泌体(exosome)，这些外泌体的特点是：直径在30-150nm之间；密度在1.10–1.19g/mL之间；表达特异性蛋白，如CD63和Alix等；携带了MSCs的重要信号分子，包括蛋白质、脂质和RNA等；保持着与亲代细胞(MSCs)相似的生物学活性，如调节免疫应答、向炎症部位归巢和参与组织修复等作用。因此，MSCs产生的外泌体可以开发成为一种无细胞治疗PE的新方法。

目前尚未见到MSCs来源的外泌体治疗PE的报道，我们首次将人脐带来源MSCs产生的外泌体应用于PE的治疗，并取得了与MSCs类似的良好疗效。与传统的细胞治疗相比，外泌体具有稳定性好、保存及应用方便快捷的优点。

发明内容：

本发明提供一种人脐带间充质干细胞来源的外泌体在制备治疗子痫前期制剂中的应用。本发明所述外泌体来源于脐带间充质干细胞，并经过一定方法提取，可以在-80度冰箱中长期保持活性(至少1年)。

所述的外泌体按以下方法制备而得：将收集的脐带间充质干细胞培养上清于4℃、2,000g离心10分钟，以去除死细胞和大的碎片；小心将上清液转移到新的无菌离心管中，于4℃、10,000g离心30分钟，以去除细胞器及小颗粒；小心将上清液转移到无菌超速离心管中，于4℃、110,000g超速离心70分钟，小心弃去上清，再加注射用生理盐水清洗一次，于4℃、110,000g超速离心70分钟，得到的沉淀即为外泌体。根据最初收集的培养基的体积不同，酌情加入注射用生理盐水重悬，用Bradford试剂盒检测总蛋白浓度，-80℃分装保存。

所述的外泌体表达标志性蛋白CD63和Alix，平均直径在100nm左右，透射电镜下观察到的形态都符合外泌体的特征。

本发明首次通过动物实验证明：所述的外泌体与其母细胞的作用类似，能有效改善孕鼠的子痫前期样症状，包括降低血压和蛋白尿，减轻肾小球肾炎症状，减少胎盘中的炎症反应，改善胎仔发育。

本发明的有益效果是：

1.所提取的脐带间充质干细胞来源外泌体能有效改善子痫前期高血压和蛋白尿的症状，减轻肾小球肾炎症状，减少胎盘中的炎症反应，并改善胎仔发育。这为子痫前期的治疗提供了新的途径。