[发明专利]SERPINB3基因在制备骨关节炎诊断制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及人SERPINB3基因在制备骨关节炎诊断制剂中的应用。

背景技术

骨关节炎(osteoarthritis，OA)是关节软骨随时间逐渐退化的慢性疾病，所述关节软骨覆盖在骨末端，形成关节的关节面。据报道有许多因素使患者易患骨关节炎，包括遗传易感性、肥胖症、意外或运动创伤、手术、药物和重体力需求。骨关节炎被认为是从关节软骨的损伤开始的。最普遍的两种对关节的损伤是运动相关损伤和长期“反复使用”关节损伤。最经常受骨关节炎影响的关节是膝、髋和手。在多数情况下，由于膝和髋必要的承重功能，这些关节中的骨关节炎比手骨关节炎更易导致残疾。随着软骨退化的发展，关节中和关节周围的其他组织(包括骨、肌肉、韧带、半月板和滑膜)中发生次级变化。软骨组织初级衰竭和其他组织次级损伤的净效应是患者发生疼痛、肿胀、虚弱和患病关节丧失机能。这些症状经常发展到具有严重影响的程度，如使患者丧失劳动力或影响生活质量。

关节软骨主要由软骨细胞、II型胶原、蛋白聚糖和水组成。关节软骨没有血或神经分布，软骨细胞是该组织中仅有的细胞类型。软骨细胞负责制造软骨基质的II型胶原和蛋白聚糖。其后该基质又具有允许用水使基质饱和的物理化学特性。这种结构-功能关系的净效应是关节软骨具有特殊的耐磨特征，并且关节软骨面之间发生几乎无摩擦的移动。在未患骨关节炎时，关节软骨经常在甚至高需求的身体条件下提供终生的无痛承重和无限制的关节移动。

与所有的活组织一样，关节软骨持续地经历更新过程，其中去除(分解代谢活性)“老”细胞和基质组分并产生(合成代谢活性)“新”细胞和分子。相对于多数组织，关节软骨的合成代谢或分解代谢周转率较低。成熟软骨结构完整性的长期维持依赖于基质合成和降解之间适当的平衡。软骨细胞通过应答于来自其环境中的化学和机械刺激维持基质平衡。软骨细胞对这些刺激合适并有效的应答是软骨动态平衡所必需的。通过合成代谢活性不足或分解代谢活性过剩破坏动态平衡可引起软骨降解和骨关节炎(Adams等，1995，Nature377Suppl：3-174)。多数受到损伤和分解代谢活性提高的组织能够启动增强的合成代谢应答，允许组织复原。不幸的是，关节软骨应答于软骨基质损伤或消耗而上调其合成代谢活性以及提高合成蛋白聚糖和II型胶原的能力非常有限。

现有的骨关节炎治疗方法包括运动、药物、休息和关节保健、手术、疼痛缓解技术、替代治疗和体重控制。治疗骨关节炎中常用的药物包括非甾族抗炎药如阿司匹林、布洛芬等；直接用于皮肤的局部疼痛缓解乳膏、橡胶和喷雾剂等。可进行手术以使骨表面重建、骨复位和置换关节。尽管各种药物疗法已被用于治疗疾病，但是它们对长期控制和预防是无效的。此外，由于骨关节炎隐匿式发生并且发展缓慢，因此骨关节炎经常在疾病发展的晚期才得到鉴定，而不是潜在治疗可能更有效的疾病发展早期。因此预防、改变或治疗骨关节炎疾病过程中的进一步发展严重依赖于鉴定疾病的早期诊断标志物，从而允许早期干涉。

发明内容

为了实现骨关节炎的早期发现，早期干预，本发明的目的在于提供一种新的骨关节炎相关基因，以及该基因的表达蛋白及其片段、类似物和衍生物。

本发明的还一目的是提供该骨关节炎相关基因在检测骨关节炎中的应用。

为实现上述目的，本发明首先提供了SERPINB3基因在制备骨关节炎诊断制剂中的应用。

优选的，所述SERPINB3基因或该基因的表达产物在骨性关节炎组织中表达下调。

进一步地，所述诊断制剂包括基因水平的诊断制剂和蛋白水平的诊断制剂。

优选的，所述基因水平的诊断制剂包括通过real-timePCR法、Northernblot、Southernblot、基因芯片、原位杂交或RNA酶保护实验等方法来检测SERPINB3基因的表达水平。

所述real-timePCR至少包括一对特异扩增SERPINB3基因的引物，所述Northernblot、Southernblot、基因芯片、原位杂交和RNA酶保护实验等至少包括检测SERPINB3基因的DNA、RNA或mRNA的探针。为了简化实验程序，所述基因水平的诊断制剂还包括核酸提取纯化类试剂盒，如DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、胶回收试剂盒、PCR纯化试剂盒等。

优选的，所述一对特异扩增SERPINB3基因的引物如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示。