[发明专利]一种同时或分别检测细胞溶酶体内硫化氢和次氯酸的荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种同时或分别检测细胞溶酶体内硫化氢和次氯酸的荧光探针，其特征在于，探针的分子式为C₄₄H₄₃N₉O₇，其结构式如式（Ⅰ）所示：

。

2.一种权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：

1）将化合物FP-1与水合肼在乙醇中，氮气保护，加热回流反应，反应完全后分离提纯得到化合物FP-2； 所述化合物FP-1结构式如下：

；所述化合物FP-2结构式如下：

；

2） 将所得化合物FP-2溶于DMF中，依次加入1-羟基苯并三唑和碳化二亚胺，室温下反应 30 min后加入化合物FP-3，在氮气保护下，室温下反应，反应完全后分离提纯得到化合物FP-4；所述化合物FP-3结构式如下：

；所述化合物FP-4的结构式如下：

；

3）将所得化合物FP-4溶于三氯甲烷中，冰水浴条件下搅拌，加入三乙胺，然后将溴乙酰溴溶于少量三氯甲烷中，并将其缓慢滴加，滴加完毕后，室温反应8小时，反应完全后，分离提纯可得到化合物FP-5；所述化合物FP-5的结构式如下：

；

4）将所得化合物FP-5溶于DMF中，在冰水浴下加入碳酸钾和吗啉，微量碘化钾，在室温下反应4h，反应完全后分离提纯得到化合物FP-6；所述化合物FP-6的结构式如下：

；

5）将所得化合物FP-6溶于DMF中，加入NaN₃，氮气保护，100℃加热反应过夜，反应完全后，分离提纯即得到目标探针化合物Lyso-HS-HA。

3.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中加热回流反应时间为1小时；所述分离提纯方法为：硅胶柱色谱分离，洗脱剂配比为二氯甲烷：甲醇=10:1。

4.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中室温反应时间为4小时；所述分离提纯方法为：乙酸乙酯萃取2次，水洗3-4次，无水硫酸钠干燥，硅胶柱色谱分离，洗脱剂配比为二氯甲烷：甲醇=20:1。

5.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中分离提纯方法为：硅胶柱色谱分离，洗脱剂配比为二氯甲烷：甲醇=20:1。

6.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤4）中分离提纯方法为：乙酸乙酯萃取2次，水洗3-4次，无水硫酸钠干燥，硅胶柱色谱分离，洗脱剂配比为二氯甲烷：甲醇=30:1。

7.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤5）中分离提纯方法为：乙酸乙酯萃取2次，水洗3-4次，无水硫酸钠干燥，硅胶柱色谱分离，洗脱剂配比为二氯甲烷：甲醇=30:1。

8.一种权利要求1所述的同时或分别检测细胞溶酶体内硫化氢和次氯酸的荧光探针的应用，其特征在于，所述荧光探针可以应用于水环境中和细胞溶酶体中H₂S、HClO和H₂S/HClO的同时或分别传感检测；所述的传感检测包含荧光检测，目视定性检测，细胞成像检测。