[发明专利]BK通道开放剂在用于建立血管平滑肌细胞钙化模型中的用途

说明书

技术领域

本发明属生物制药领域，涉及影响血管平滑肌细胞钙化模型建立进程的新的抑制剂—大电导钙激活钾通道(又称BK通道)开放剂NS1619的新的用途，具体涉及NS1619在用于建立血管平滑肌细胞钙化模型中的用途，尤其是NS1619在用于制备抑制血管平滑肌细胞钙化中的新用途。

背景技术

CKD-MBD(chronic kidney disease-mineral and bone disorder)是指由慢性肾脏病引起的矿物质和骨代谢系统性紊乱。现有技术公开了血管钙化是CKD的常见并发症，各期CKD患者均存在程度不等的钙磷代谢紊乱，由此所引起的血管钙化是CKD患者晚期心血管事件死亡的独立危险因素，约有30-65％慢性肾病3-5期患者及50-80％5期患者会出现血管钙化。一般血管钙化发生在两个位点：内膜和中层，在成年慢性肾病(CKD)患者中，血管壁钙化几乎都是在中层。目前业内研究人员认为许多因素都参与了血管钙化的发病过程，提出了骨形成蛋白调节学说、细胞控制学说、凋亡体基质囊泡学说和氧化应激学说等多种假说。

研究报道，大电导钙激活的钾通道(BK通道)广泛分布于各种类型的细胞中，尤其在平滑肌细胞、神经元和内分泌细胞等兴奋性细胞中表达丰富。研究显示，BK通道受膜电位和细胞内Ca²⁺浓度双重调节，是细胞兴奋性，肌肉收缩和递质释放等多种生理过程的强大调节器。有研究显示，BK通道的激活、失活和变异与多种疾病调节有关，例如：作为血管平滑肌细胞膜上的优势离子通道，BK通道的激活和表达增加能够平衡高血压时冠脉张力的上升，增强平滑肌细胞舒张功能适应性；在固有免疫中，阻断BK通道使微生物杀伤和消化过程受到抑制；在若干种肿瘤的发生过程中，BK通道抑制肿瘤细胞增殖，影响其迁移，表现出抗肿瘤的特性，在神经系统中，激活的BK通道对神经细胞有保护作用。

NS1619是BK通道开放剂的一种，目前尚未见关于NS1619具有抑制血管平滑肌细胞钙化的作用的报道。

发明内容

本发明的目的是提供大电导钙激活钾通道(BK)开放剂NS1619的新的用途，涉及NS1619在用于建立血管平滑肌细胞钙化模型中的用途，尤其是NS1619在用于制备抑制血管平滑肌细胞钙化制剂中的新用途。

本发明通过细胞实验，证实了NS1619能显著抑制血管平滑肌细胞的钙沉积，抑制钙化进程中的标志蛋白，以及进一步产生的抑制血管平滑肌细胞钙化的用途。

本发明所述的NS1619是BK通道开放剂的一种，通过市购的渠道获得。

本发明通过培养和鉴定原代血管平滑肌细胞；通过分别使用正常DMEM培养基(对照组)、含钙化诱导剂(10mMβ-GP+3.6mM Ca²⁺)的DMEM培养基(钙化组)、含钙化诱导剂(10mMβ-GP+3.6mM Ca²⁺)及20μM NS1619的DMEM培养基(NS1619作用组)、含20μM NS1619的DMEM培养(NS1619对照组)基对原代血管平滑肌细胞进行培养，建立钙化模型；通过钙沉积检测试剂盒检测各组中血管平滑肌细胞沉积的Ca²⁺的含量；通过ALP试剂盒检测各组血管平滑肌细胞钙化的前体分子ALP的表达量的变化；通过Real Time PCR检测RNA水平各组血管平滑肌细胞钙化标志蛋白Runx2,OCN,OPN的表达量变化；通过茜素红染色实验对各组血管平滑肌细胞的钙结节染色，颜色深浅反应钙化的程度；经细胞生物学实验结果证明，NS1619具有以下抑制血管平滑肌细胞钙化的作用：

1、抑制钙化进程中Ca²⁺的沉积；

2、抑制钙化前体标志分子ALP的表达；

3、抑制RNA水平钙化标志分子OCN,OPN的表达；

4、抑制钙结节的产生，从而抑制血管平滑肌钙化进程。

本发明经细胞实验结果证明，NS1619具有抑制血管平滑肌细胞钙化的作用，包括抑制钙化进程中Ca²⁺的沉积的作用；抑制钙化标志分子表达的作用；抑制钙结节产生的作用。

本发明所述的NS1619进一步可用于制备治疗血管硬化及平滑肌收缩舒张功能紊乱相关疾病的药物，包括治疗动脉粥样硬化、哮喘、脑缺血损伤、尿潴留等平滑肌功能紊乱相关疾病。