[发明专利]一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，提供了一种基于CeO₂@Cu₂O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

肿瘤的发病率高，生长和转移速度快，对人类的健康有极大的危害。肿瘤标记物是肿瘤细胞产生和释放的以抗原、酶、激素等形式的代谢产物存在于肿瘤细胞内或宿主体液中，其在临床上对于随原发肿瘤的发现，肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断，肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测产生极大的影响，引起人们的广泛关注。

CA15-3、CEA等常见的肿瘤标志物，对于肝癌的诊断都能起到一定的作用。对于肿瘤标记物的检测方法很多，如放射免疫分析法、免疫放射分析法、酶标记免疫分析法、化学免疫发光分析法、时间分辨荧光免疫分析法等，但多数检测方法繁琐，操作复杂，费用昂贵，检出限高，因此，建立一种快速、简便、灵敏的检测方法有重要意义。

夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低、等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。而构建电化学免疫传感器的关键有两点：其一是采用简单、快速、有效的方法将抗原抗体等生物分子固定在电极表面；其二是开发传感器的信号放大技术。

发明内容

本发明提供了一种基于CeO₂@Cu₂O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用，实现了对肝癌肿瘤标志物的高灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种基于CeO₂@Cu₂O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的CeO₂@Cu₂O/Au@Pt的夹心型免疫传感器，用于检测肿瘤标志物。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1. 一种基于CeO₂@Cu₂O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）以质量浓度为1%的HAuCl₄溶液为底液，在-0.2 V电压下扫描30 s，将金电沉积到电极表面，用超纯水冲洗，晾干；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁溶液孵化到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

（4）继续将3 µL、质量分数为0.5 ~ 2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 80 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag标准溶液到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；

（6）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的CeO₂@Cu₂O/Au@Pt-Ab₂检测抗体孵化物溶液孵化于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一种基于CeO₂@Cu₂O/Au@Pt的夹心型免疫传感器。

2.所述CeO₂@Cu₂O/Au@Pt-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备，步骤如下：

（1）CeO₂@Cu₂O的制备

将8 ~ 12 mL 、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到100mL、0.01 mol/L的CuCl₂溶液，充分搅拌0.5 h；继续将8 ~ 12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中， 55℃下充分搅拌5h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12h，制得Cu₂O立方纳米晶体；