[发明专利]一种用于检测人源性axin2基因表达水平的引物探针组合及其应用

说明书

技术领域本发明属基因技术领域，本发明涉及一种用于检测人源性Axin2基因表达水平的引物探针组合。

背景技术Axin2是Axin家族的两个同源蛋白之一，是一种普遍存在于生物体内的蛋白质，其作为一种多功能的支架蛋白参与了多种生理病理过程，涉及到胚胎发育、细胞凋亡、糖原代谢等过程，在Wnt信号通路、应激反应蛋白激酶（SAPK）信号通路、转化生长因子β（TGFβ）信号通路和胰岛素信号转导通路中扮演重要角色，在肿瘤形成、胚胎发育等过程中具有重要的生物学功能。通过对Axin2的研究可研究肿瘤性疾病的发生发展机制。Axin是Wnt信号通路的抑制因子，Wnt信号通路可以调节细胞的增值、分化及运动。Axin对癌症的发生发展具有重要作用，研究发现原癌细胞中存在Axin基因，并且在癌细胞中引入野生型Axin基因可导致癌细胞死亡。对结直肠癌的研究发现结直肠癌中可存在Axin2突变基因，最主要的突变形式为羧基端缺失突变(mutant-typeAxin2,mtAxin2)，突变的Axin2会干扰β-catenin的降解,引起β-catenin在核内的积聚进而激活Wnt信号转导系统。此外，Axin可以促进抑癌基因p53产物的磷酸化，进而提高抑癌基因p53基因的转录活性和细胞凋亡；并且在高表达Axin的转基因动物胸腺和脾内表现高水平的细胞凋亡。Axin在Wnt通路中的作用相对明确，但在SAPK/JNK和TGFβ信号通路中的作用研究还较少，对Axin在细胞分化、增殖、凋亡及肿瘤发生发展等过程中的作用仍有很多未知之处，需要进一步研究。

对Axin的研究手段除采用蛋白质组学方面的研究包括免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western印迹杂交研究外，分子生物学技术亦是很重要的研究手段，荧光定量PCR方法是简便快捷的研究方法，从基因表达方面对Axin的表达水平进行定量研究，可很好辅助Axin的功能研究，也可通过对Axin基因表达水平的研究探索肿瘤靶向药物的疗效。目前尚未有专门针对人源性Axin2基因表达水平研究的高特异性引物探针检测系统。

发明内容本发明通过设计特异性引物探针系统采用荧光定量PCR方法检测人源性Axin2基因的表达水平，便利了实验研究中Axin2基因表达水平的检测。本发明的工作原理是荧光定量PCR相对定量原理，采用beta-actin基因作为管家基因即参考基因，通过2-△△Ct法确定基因表达水平。

根据NCBI公布的humanAxin2mRNA序列（序列号：NM_004655.3）设计引物探针见表1：

表1.Axin2引物探针设计

引物名称序列F-axinGGTTCTGGCTATGTCTTTGCACCR-axinCTGTTTCTTACTGCCCACACGATP-axinFam- ATATCTCACTGTCGTTGGCGCTGG-BHQ1

选择beta-actin作为内参，根据NCBI公布的betaactin的mRNA序列（序列号：NM_031144.3）设计引物探针序列如下表2：

表2.beta-actin引物探针设计