[发明专利]一种墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于兰科植物组织培养技术领域，具体涉及一种墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的快速繁殖方法。

背景技术

墨兰(Cymbidium sinense)为兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidium)地生兰类多年生草本花卉，为五大传统国兰之一，其叶片飘逸秀美，花瓣香气浓郁，花色多变，花期冬季至早春，具有很高的观赏价值和经济价值。因其多在春节前后开花，又称报岁兰，其传统的分株繁殖方法，繁殖系数极低，一般每年只能增殖1～3倍。

虎头兰(Cymbidium hookerianum)是兰科兰属附生性多年生草本植物。原产于我国西南地区，主要分布在贵州、西藏、云南、四川等省区，世界各国多有引种栽培。目前我国虎头兰的种苗、成品花大多从日本、韩国及我国台湾地区引进。虎头兰叶长碧绿，花茎斜生，花浅黄绿色、表面有紫红色条纹或小斑点，花形似“虎头”，十分典雅，因而具有很高的观赏价值，是世界著名的“兰花新星”，深受各国人民的喜爱。但是，虎头兰主要采取传统的分株方法进行繁殖，其繁殖率低，周期长，远不能满足花卉市场需求。

大花蕙兰是兰属的多代杂交种，虎头兰是大花蕙兰原始杂交亲本材料之一，二者均为附生兰。近年，有关附生兰与地生兰的杂交育种研究工作取得了一些进展，一些杂交兰可通过杂交种子无菌萌发成苗，但是，由于基因型不同，附生兰与地生兰的杂交兰对培养基营养成分、激素配比等要求不同，还存在着繁殖系数低，长势差、生根困难等问题。

运用生物技术快速繁殖名优国兰已有一些报道，翁锦周等(亚热带植物科学，2006，35(3)37～38)以墨兰(Cymbidium sinense)地下根状茎段为外植体，探讨不同浓度活性炭对其离体培养的影响。结果表明，在MS+NAA2.0mg/L+l0％椰汁的培养基中加入1.0g/L活性炭对原球茎的诱导效果最好；MS+BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+活性炭4.0g/L适合于不定芽分化；在1/2MS+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L+l0％椰汁的培养基中加入0.5～3.0g/L活性炭有利于提高成苗率，但是，该诱导培养基用于墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的组织培养中，外植体稍膨大却并未形成原球茎。

曹受金以虎头兰茎尖、茎段和叶为外植体开展了组培研究，结果表明：适宜的原球茎诱导培养基：KC+5mg/L 6-BA+0.5(或1.0)mg/L NAA+0.5～1％蔗糖；茎尖的原球茎诱导率为38～75％；茎段的原球茎诱导率为48～78％；叶的原球茎诱导率为5～16％；增殖培养基：KC+5mg/L BA+0.1(或0.5)mg/L NAA+0.2蛋白胨；原球茎的鲜重増加率为50～58％(曹受金，北方园艺，2007(3)：167～169)，但是，该诱导培养基用于墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的组织培养中，也未获得原球茎。

“红美人”是墨兰红樱姬与虎头兰的杂交品种，株型漂亮，花期长，集花大、花香、花色艳美于一体，目前，其繁殖方式主要为常规分株繁殖，一年只能得到1～3倍的增殖速度，繁殖系数低，周期长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的组培快速繁殖方法，以杂交兰无菌苗基部组织为材料，诱导原球茎进行增殖、分化，壮苗、生根，培养程序简单，繁殖系数大，速度快，生产成本低，种苗质量高，便于工厂化生产。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：

1)诱导培养

取墨兰与虎头兰的杂交兰无菌苗，切去根及顶部叶片，取基部组织0.5～0.8cm，剥去1～2层叶鞘，接种于诱导培养基中，光照培养45～60d，获得杂交兰原球茎；

其中，所述的诱导培养基包括：MS培养基，6-苄氨基腺嘌呤2.0～6.0mg/L，萘乙酸0.5～3.0mg/L，激动素0.5～1.5mg/L，毒莠定0.2～0.5mg/L，水解酪蛋白0.5～1.5g/L，活性炭0.1～0.5g/L，蔗糖20～40g/L和琼脂粉5.5～6.5g/L，pH＝5.4～5.8；

2)增殖培养与分化

取步骤1)获得的杂交兰原球茎，进行切割，以2～4个原球茎为一团，接种于原球茎增殖与分化培养基中，培养30～60d，形成新生原球茎，新生原球茎再分化成不定芽；