[发明专利]鉴定或辅助鉴定牡蛎疱疹病毒的试剂盒及其专用引物

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及鉴定或辅助鉴定牡蛎疱疹病毒的试剂盒及其专用引物。

背景技术

牡蛎疱疹病毒(OsHV)粒子呈六角形，直径70-90nm，具单层外膜，有的病毒粒子具浓密的类核，受感染的牡蛎消化腺呈苍灰色，散发性死亡，造成了严重的经济损失。此病常发生于发电站排出的热水养殖的牡蛎，发病水温为28-30℃，水温下降后，此病随之消失，发病与水温密切相关。

目前，已经建立的OsHV检测方法，主要包括电镜观察和免疫学诊断方法等。这些方法能从形态学和血清学方面对宿主感染OsHV的状况进行诊断，但是明显存在费时、费力和费用高等缺点。而且较低的灵敏度和特异性使得这些传统方法存在较大的局限性，通常只有在疾病发生时才能检测到病原，不能对OsHV的早期感染进行有效诊断。PCR方法操作简单且能实现快速诊断，可以提高OsHV的检测灵敏度，但该方法不能定量，而且操作过程中更易造成PCR产物的气溶胶污染，出现假阳性现象。作为疾病的诊断依据，当一定数量的病原体存在时才具有临床意义。因此，在疾病的临床诊断方面，定量检测方法的应用与其它检测方法相比具有较大的优越性。以单克隆抗体和多抗克隆抗体为基础的免疫学检测方法可以对OsHV进行定量分析，但是操作复杂，定量不够准确，而且需要高度纯化的病毒作为该方法定量的基础。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何鉴定牡蛎疱疹病毒。

本发明首先提供了一种特异引物对，由用于扩增包括特异DNA分子在内的DNA分子的两条引物组成；所述特异DNA分子为牡蛎疱疹病毒1型的基因组中引物OsHV-f和引物OsHV-r的靶序列；所述引物OsHV-f为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物OsHV-r为序列表的序列2所示的单链DNA分子。所述特异引物对具体可由引物OsHV-f和引物OsHV-r组成。所述特异引物对的功能为如下(a)或(b)：(a)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为牡蛎疱疹病毒1型；(b)鉴定或辅助鉴定待测生物样品是否含有牡蛎疱疹病毒1型。所述待测生物样品中的生物具体可为扇贝，更具体可为栉孔扇贝。所述引物OsHV-f和所述引物OsHV-r可以单独包装，也可以混合包装。所述特异DNA分子具体可如序列表的序列4自5’末端第218-307位核苷酸所示。

当应用所述特异引物对鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为牡蛎疱疹病毒1型时，具体方法如下：以待测病毒的基因组DNA或待测病毒的总RNA反转录得到的cDNA为模板，采用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到特异PCR扩增产物、待测病毒为候选的牡蛎疱疹病毒1型，如果不能得到所述特异PCR扩增产物、待测病毒为候选的非牡蛎疱疹病毒1型。所述特异PCR扩增产物具体可为90bp。所述特异PCR扩增产物具体可如序列表的序列4自5’末端第218-307位核苷酸所示。

当应用所述特异引物对鉴定或辅助鉴定待测生物样品是否含有牡蛎疱疹病毒1型时，具体方法如下：以待测生物样品的总DNA或待测病毒的总RNA反转录得到的cDNA为模板，采用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到特异PCR扩增产物、待测生物样品疑似含有牡蛎疱疹病毒1型，如果不能得到所述特异PCR扩增产物、待测生物样品疑似不含有牡蛎疱疹病毒1型。所述特异PCR扩增产物具体可为90bp。所述特异PCR扩增产物具体可如序列表的序列4自5’末端第218-307位核苷酸所示。

本发明还提供了一种试剂盒，包括所述特异引物对。所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)：(a)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为牡蛎疱疹病毒1型；(b)鉴定或辅助鉴定待测生物样品是否含有牡蛎疱疹病毒1型。所述待测生物样品中的生物具体可为扇贝，更具体可为栉孔扇贝。所述引物OsHV-f和所述引物OsHV-r可以单独包装，也可以混合包装。

所述试剂盒还可包括特异探针；所述特异探针为探针OsHV-P；所述探针OsHV-P的核苷酸序列如序列表的序列3所示。所述探针OsHV-P具体可为TaqMan探针。所述探针OsHV-P中，序列表的序列3所示的单链DNA分子的一端具有荧光基团、另一端具有荧光淬灭基团。所述探针OsHV-P中，序列表的序列3所示的单链DNA分子的5’端具有荧光基团FAM、另一端具有荧光淬灭基团TAMRA。所述试剂盒中，所述引物OsHV-f、所述引物OsHV-r和探针OsHV-P所述可以单独包装，也可以混合包装。