[发明专利]一种促进哈茨木霉根表定殖的蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种促进哈茨木霉根表定殖的蛋白及其应用，属于应用微生物技术领域。

技术背景

HFB蛋白是丝状真菌特有的疏水性小蛋白。在有关曲霉、木霉的报道中，提及该蛋白家族成员与真菌孢子表面疏水结构的形成、菌丝的延伸和疏水材料表面的粘附作用等有关，但未见其参与调控木霉定殖植物根表的报道。

随着微生物技术的发展，经人工筛选和驯化改良的外源微生物及其制剂在农业生产、环境污染修复等领域中广泛应用。但由于土壤和作物种类的差异，土壤温度、湿度的变化以及土著微生物的存在显著影响着外源微生物的定殖与扩增，从而使得外源微生物的作用效果不明显，严重制约了功能微生物的进一步应用。哈茨木霉(Trichoderma harzianum)SQR-T037是我国科学家分离得到并已实现商品化应用的一株兼具生防和促生功能的植物有益菌。由于在田间环境下存在大量的土著微生物与SQR-T037竞争养分、生存空间等，SQR-T037及其相关产品的田间应用效果并没有像实验室条件下那么明显与稳定。因此，大幅提高木霉SQR-T037菌株在植物根部的定殖量，使其快速成为众多根际微生物中的优势种，是发挥其生防与促生功能的保障，对木霉及其相关产品的意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的HFB蛋白及其编码基因。本发明发现了参与调控哈茨木霉定殖作物根部的相关基因(蛋白)。

本发明的另一目的在于提供HFB蛋白在促进哈茨木霉根表定殖中的应用。

本发明的又一目的在于提供HFB蛋白在制备以功能木霉为主的微生物菌肥中的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种HFB蛋白，该HFB蛋白为哈茨木霉HFB蛋白家族成员，包括HFB4蛋白和HFB8蛋白中的至少一种，所述的HFB4蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述的HFB8蛋白具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

上述HFB蛋白的编码基因，其在于所述HFB4蛋白的编码基因具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；所述HFB8蛋白的编码基因具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

含有上述HFB蛋白编码基因的重组表达质粒、转基因细胞系或转基因工程菌。

上述的重组表达质粒，是将如SEQ ID NO.2所示的HFB4蛋白编码基因hfb4或如SEQ ID NO.4所示的HFB8蛋白编码基因hfb8插入到酵母表达质粒pPICZαA的EcoR I和Xba I酶切位点之间得到的。

该重组表达质粒具体是采用以下步骤制备：以哈茨木霉菌株SQR-T037的cDNA为模板分别设计引物进行PCR扩增，将得到的PCR扩增产物和酵母表达质粒pPICZαA分别用EcoR I和Xba I酶切连接后分别得到表达HFB4蛋白和HFB8蛋白的酵母表达质粒pPICZαA::HFB4和pPICZαA::HFB8；

克隆hfb4基因的引物如下：

上游引物hfb4-F:GGCTGAAGCTGAATTCACTCAGGAGCACCAGTTCGA(SEQ ID NO.5)

下游引物hfb4-R:GAGTTTTTGTTCTAGAATCTGGGGAAGGGCATCCTG(SEQ ID NO.6)

克隆hfb8基因的引物如下：

上游引物hfb8-F:GGCTGAAGCTGAATTCGCTGTCTGCCCTGATGGTG(SEQ ID NO.7)

下游引物hfb8-R:GAGTTTTTGTTCTAGAATGTGGGTTCCAGCGGGGTT(SEQ ID NO.8)。

上述的转基因工程菌，是将上述的重组表达质粒用Sac I单酶切线性化后转化入感受态毕赤酵母KM71H细胞中得到的可分别表达HFB4蛋白和HFB8蛋白的酵母工程菌。

上述的HFB蛋白在促进功能木霉根表定殖中的应用。

本领域技术人员研究发现了HFB蛋白参与调控功能木霉在植物根表定殖方面的应用。具体是HFB蛋白的正调控功能的应用；所述正调控功能是将HFB蛋白在酵母中表达后外源添加入作物种植体系中，快速增加功能木霉菌的定殖量。

所述的作物是番茄或黄瓜；所述的功能木霉为哈茨木霉。

上述的HFB蛋白在制备以功能木霉为主的微生物菌肥中的应用。