[发明专利]一种木聚糖酶的生产方法

说明书

一种木聚糖酶的生产方法，包括以下步骤：（1）一级种子培养；（2）二级种子培养；（3）接种到培养基，发酵，加入诱导物，得到发酵液；（4）将发酵液压滤，浓缩；（5）加入保护剂，灌装。此方法生产的木聚糖酶既含有高木聚糖酶活力，又含有纤维素酶、β‑葡聚糖酶等多种副酶活。

技术领域

本发明属于酶制剂生产领域，特别是涉及一种木聚糖酶的生产方法。

背景技术

木聚糖酶是可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称。木聚糖酶在造纸、食品、饲料、纺织、酿酒、医药、环境和能源等行业被广泛应用，前景十分看好。

工业用木聚糖酶主要由微生物发酵、提炼获得，常用的工业木聚糖酶发酵菌种有里氏木霉（Trichoderma reesei）和毕赤酵母（Pichia pastoris）。用里氏木霉发酵生产的木聚糖酶除了含木聚糖酶活力外，还有相当多的纤维素酶、β-葡聚糖酶等活力，适用于饲料、酿酒、环境和能源等各种破坏、降解天然木质纤维结构的领域；而用毕赤酵母生产的木聚糖酶其他副酶活少，木聚糖酶活力高，适用于食品、纺织、造纸等领域。

近年来，在酒精等发酵领域开发出越来越多能利用木糖作为碳源的菌种，使发酵原料的来源有了更大的拓展，进而带动了木聚糖酶的需求。在天然组织中，木聚糖和纤维素、葡聚糖、木质素等多聚糖组成了牢固的木质纤维结构，打破这个天然结构的束缚需要纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶等多种酶制剂协同作用，而产生木糖则需要更高活力的木聚糖酶。

发明内容

在基于此，有必要提供一种既含有高木聚糖酶活力，又含有纤维素酶、β-葡聚糖酶等多种副酶活的木聚糖酶生产方法。

一种木聚糖酶的生产方法，包括以下步骤：

（1）将毕赤酵母菌种按照质量百分比6%～12%的接种量接种到毕赤酵母一级种子培养基中，保持溶氧25%～55%，28℃～30℃培养8h～12h，得到毕赤酵母一级种子液，将里氏木霉的菌种按照质量百分比10%～15%的接种量接种到里氏木霉一级培养基中，保持溶氧25%～55%，28℃～32℃培养16h～20h，得到里氏木霉一级种子液；

（2）将步骤（1）中得到的毕赤酵母一级种子液按照质量百分比6%～12%的接种量接种到毕赤酵母二级种子培养基中，保持溶氧25%～55%，28℃～30℃培养8h～12h，得到毕赤酵母二级种子液，将步骤（1）中得到的里氏木霉一级种子液按照质量百分比10%～15%的接种量接种到里氏木霉二级培养基中，保持溶氧25%～55%，28℃～32℃培养16h～20h，得到里氏木霉二级种子液；

（3）将步骤（2）中得到的毕赤酵母二级种子液按照质量百分比6%～12%的接种量接种到发酵培养基中，保持溶氧25%～55%，pH4.2以上，转速100rpm～120rpm，28℃～32℃培养36h～42h，将步骤（2）中得到里氏木霉二级种子液按照质量百分比10%～15%的接种量接种到发酵培养基中，保持温度、溶氧、pH条件不变，转速150rpm～170rpm培养16h～18h，按照质量百分比0.5%～5%的加量加入诱导物，保持温度、溶氧、pH条件不变，转速220rpm～240rpm培养72h～78h后得到木聚糖酶发酵液，其中发酵培养基的成分为：120g/L～150g/L原糖蜜，70g/L～90g/L玉米DDGS，0.5g/L～1g/L磷酸二氢铵，0.5g/L～0.75g/L碳酸钙，0.4g/L～0.75g/L硫酸锰，0.05g/L～0.1g/L蛋白酶，0.5g/L～0.75g/L植酸酶；

（4）将步骤（3）得到的发酵醪液进行板框压滤，澄清后超滤浓缩到所需要的酶活力；

（5）向步骤（4）得到的滤液中加入质量百分比0.05%～0.5%的防腐剂和质量百分比15%～25%的保护剂，灌装成为成品木聚糖酶。