[发明专利]一种白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及银杏技术领域，尤其涉及一种白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的制备方法。

背景技术

银杏内酯(英文名：ginkgolide)化合物属于萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏叶中一类重要的活性成分。白果内酯(bilobalide；BB)属倍半萜内酯，是目前从银杏叶中发现的唯一的一个倍半萜内酯化合物。银杏内酯A(ginkgolide A；GA)、银杏内酯B(ginkgolide B；GB)、银杏内酯C(ginkgolide C；GC)、银杏内脂M(ginkgolide M；GM)、银杏内脂J(ginkgolide J；GJ)为二萜类化合物，其差别在于含有的羟基数目和羟基连接的位置不同。银杏内酯分子具有独特的十二碳骨架结构，嵌有一个叔丁基和六个五元环，包括一个螺壬烷、一个四氢呋喃环和三个内酯环。银杏内酯对血小板活化因子(PAF)受体有强大的特异性抑制作用，其中银杏内酯的抗PAF活性最高。PAF是血小板多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷脂，是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂，它与许多疾病的产生、发展密切相关。而银杏内酯目前被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂。

申请号为201310624971.9的中国专利公开了一种银杏内酯A与银杏内酯B的精制方法，包括：取银杏叶提取物浸膏1000g，用水溶液稀释至0.5g生药/mL，加入1000mL乙酸乙酯进行萃取，共萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，于45℃减压浓缩至无溶剂，加入10％的乙醇使浓缩液浓度为0.5g/mL，湿法装柱，使药液通过MCI树脂，先用30％的乙醇洗脱树脂除杂，以除去水溶性和大极性杂质，共洗脱3BV，洗脱速度为1BV/h，再用40％的乙醇以同样的流速洗脱树脂，分别收集前2BV洗脱液和后2BV洗脱液，分别于45℃减压浓缩至1g/mL浸膏，加入500mL 80％乙醇，70℃加热至溶解，4℃冰箱静置24小时析晶，析出晶体后抽滤，分别得到银杏内酯A和银杏内酯B的粗品，将得到的银杏内酯A和银杏内酯B的粗品分别同50mL 80％的乙醇重结晶1次，温度4℃，静置时间24h。析出晶体，抽滤，母液合并，结晶分别于80℃烘干，得到银杏内酯A 0.76g、银杏内酯B 1.07g，银杏内酯A的纯度为95.6％，银杏内酯B的纯度为96.2％。

现有技术提供的这种银杏内酯A和银杏内酯B的精制方法虽然工艺简单、损失较少，能够同时分离纯化银杏内酯A和银杏内酯B，但是这种方法制备银杏内酯A和银杏内酯B的纯度和收率较低。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的制备方法，本发明提供的方法制备白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的纯度和收率均较高。

本发明提供了一种白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的制备方法，包括：

将银杏叶采用醇类化合物回流提取后经过滤过、浓缩、分散、再次滤过，得到滤液；

将所述滤液萃取后依次进浓缩和干燥，得到银杏总内酯粗品；

将所述银杏总内酯粗品在溶剂中和硅胶混合后粉碎，得到样品硅胶；

将所述样品硅胶在真空液相色谱分离装置中进行梯度洗脱，按照所述梯度洗脱过程中的洗脱液包括弱极性溶剂A和强极性溶剂B，所述弱极性溶剂A和强极性溶剂B的洗脱比例为(8.2～7.8)：(1.8～2.2)，得到白果内酯；所述弱极性溶剂A和强极性溶剂B的洗脱比例为(7.2～6.8)：(3.2～2.8)，得到银杏内酯C；所述弱极性溶剂A和强极性溶剂B的洗脱比例为(6.2～5.8)：(4.2～3.8)，得到银杏内酯A；所述弱极性溶剂A和强极性溶剂B的洗脱比例为1：(0.5～1.5)，得到银杏内酯B；

所述弱极性溶剂A包括石油醚或环己烷；

所述强极性溶剂B包括乙酸乙酯或丙酮。

优选的，所述醇类化合物为碳原子数为1～5的醇类化合物。

优选的，所述醇类化合物为甲醇或乙醇。

优选的，所述萃取的试剂为乙酸乙酯。

优选的，所述溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮或乙酸乙酯。

优选的，所述硅胶的粒度为80目～100目。

优选的，所述银杏总内酯粗品和硅胶的质量比为1：(0.8～1.2)。

优选的，所述弱极性溶剂A和强极性溶剂B的洗脱比例为8：2，得到白果内酯；

所述弱极性溶剂A和强极性溶剂B的洗脱比例为7：3，得到银杏内酯C；