[发明专利]抗蕈类免疫调节蛋白的单株抗体及其应用

说明书

本发明涉及抗蕈类免疫调节蛋白(Fungal Immunomodulatory Protein，FIP)之单株抗体，以及应用该单株抗体的检测方法。在某些实施例中，该检测方法包含利用该单株抗体快速、专一地检测各类型产品中FIP之含量。

技术领域

本发明涉及一种单株抗体以及应用该单株抗体的检测方法。特定言之，本发明开发抗蕈类免疫调节蛋白(fungal immunomodulatory protein，FIP)的单株抗体，并以该单株抗体快速、专一地检测各类型产品中FIP含量。

背景技术

FIP是一群普遍存在于食药用菇菌中并具有免疫调节活性的小分子蛋白质。最早发现的FIP是Kino等人于1989年从Ganoderma lucidum的菌丝体分离，确认其活性后命名为LZ-8。随后其他研究团队也发现了八种以上的FIPs，包含牛樟芝(Antrodia camphorate)的FIP-aca、金针菇(Flammulina velutipes)的FIP-fve、草菇(Volvariella volvacea)的FIP-vvo、灵芝(G.lucidum)的LZ-9、松杉灵芝(G.tsugae)的FIP-gts、紫芝(G.sinensis)的FIP-gsi、茯苓(Poria cocos)的FIP-pcp、云芝的FIP-tve以及小孢子灵芝(G.microsporum)的GMI(FIP-gmi)等(Hsu等人,1997,Biochem J,323(Pt 2),557-565；Ko等人,1995,Eur JBiochem,228,244-249；Xuanwei等人,2008,Planta Med,74,197-200；及US 7,601,808))，其中以灵芝属真菌(Ganoderma spp.)来源的FIP为大宗。不同来源的FIP具有类似的基因序列及蛋白质立体结构，并以同源双体(Homodimer)的结构存在于自然界中。

FIPs在in vitro及in vivo试验中皆显示了免疫调节功能，但不同FIP对不同实验样品具不同程度作用，其效果亦有剂量差异性。FIP具过敏体质调节作用，可抑制全身性过敏反应(systemic anaphylaxis reaction)及局部过敏反应(Arthus reaction)，推测与刺激活化T_H1(T helper 1)的细胞激素有关。LZ-8可有效抑制老鼠抗体的生产，其可能藉阻断抗体的产生，达到抑制过敏的效果，相似的结论也在其他FIP研究中发现。此外，LZ-8可抑制非肥胖型糖尿病属(nonobese diabetic,NOD)的自体免疫性第一型糖尿病发生，这有可能是藉由调控细胞表面附着的分子进而调节细胞间的交互作用所致。LZ-8亦可提高异体移植的成功率，可显著推迟排斥现象的发生。研究指出FIP-fve可有效活化T细胞，被活化的T细胞可分泌IFN-γ，与细胞间黏附分子(adhesion molecular)生成有密切关系。此活化路径与p38活化的Mitogen-activated protein kinase(MAPK)调节有关，故FIP并非直接调节免疫系统，而是透过调控免疫系统中各细胞间的交互作用，进而达到抗肿瘤及免疫调节的功能。另外，以FIP-fve处理脾细胞后，其IL-2及IFN-γ基因会被诱导，故推测其是影响细胞转录层次的调控。利用巴斯德毕赤氏酵母菌(Pichia pastoris)生产的重组蛋白质rLZ-8刺激人体T细胞株Jurkat cells，发现其可能与T细胞受体(T cell receptor,TCR)上的CD45结合，并藉由促进B细胞表面的MHC class II、CD80/B7-1及CD86/B7-2表达，刺激Src酪氨酸蛋白质激酶家族(Src protein tyrosine kinase family,Src PTK family)、活性氧物种(reactive oxygen species,ROS)、钙离子和不同蛋白质激酶的路径，促使IL-2表达。

FIP的诸多生理活性功能使其成为具有开发成药品、健康食品等产品的潜力目标。此类产品可以各种形式生产、贩卖，包括菇菌子实体、菌丝体或其粗淬物以及异源蛋白表达生产、纯化的纯蛋白质等。然而，目前并无任何方法可检测各类型产品中FIP含量，因而有必要开发检测产品中FIP含量的方法。

发明内容