[发明专利]一种高纯度红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从决明子中制备获得纯度大于98％的红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的制备方法，尤其是通过闪式提取从决明子中制备红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的工艺方法。

背景技术

决明子(Semen Cassiae)是豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子，为临床上常用中药，具有清肝明目、润肠通便的功效，常用于治疗目赤涩痛、羞明多泪、头痛眩晕、目暗不明、大便秘结等。现代医学研究表明决明子还具有增强机体免疫力、抗衰老等多方面作用。决明子无论在药用、保健等方面都具有广泛的研究、利用和开发前景。

决明子主要含有蒽醌类和萘并吡喃酮类等化学成分，具有多种药理活性，如保肝、降糖、降脂、抗突变、抗雌激素样作用等.红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷为决明子中主要萘骈吡喃酮类成分，具有降血脂、保肝、抗突变、抗雌激素等作用，为决明子主要药效成分之一。

姜艳艳等在对决明子化学对照品红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的稳定性研究表明，红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷对照品在60℃以下，相对湿度90％，加热8h后仍有85.0％以上剩余，但是随着温度增高，湿度增大，红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷稳定性逐渐降低。表明其在较低温度环境及含水较少的溶液中，红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷稳定性较好，

红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的分离制备方法主要有：刘斌等(中国专利CN201110001317.3，2014年公开)采用20％～50％乙醇加热回流提取得决明子提取物浸膏，浸膏用甲醇回流提取得甲醇提取物；甲醇提取物采用硅胶干柱色谱法分离得到红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷粗品，粗品采用硅胶干柱色谱法、C₁₈反相色谱柱纯化得到红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷黄色粉末，其主要工艺步骤中用含水乙醇加热回流提取，需要较高温度且湿度较大，容易破坏红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的结构，且在制备过程中用的试剂量很大，不利于大规模推广应用。目前，温度低、时间短、工艺简便的制备方法用于大规模(克级以上)制备98％含量红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的工作尚未见报道。

发明内容

本发明以决明子为原料，包括原料粉碎、提取、分离、精制、干燥等步骤，其特征在于所述的制备方法包括以极性有机溶剂为溶媒、在10～60℃进行闪式提取，提取液经硅胶柱层析、反相色谱、冷冻干燥等工艺。本发明所述的红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷制备方法不仅温度低，有效成分不易破坏，而且时间短，提取率高，产品纯度高，且可用于大规模工业化生产。

本发明的目的是开发出一种工艺简单、提取率高且纯度在98％以上的红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案：

1.一种高纯度红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的制备方法，尤其是通过闪式提取从决明子中制备红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的工艺方法。所述方法以决明子为原料，包括提取、精制、干燥等步骤，其特征在于所述的制备方法包括以下具体步骤：

(1)取决明子，加入按药材质量计5～20倍溶剂，闪式提取1～3次，过滤，合并提取液，回收溶剂，得决明子提取物。

(2)取步骤(1)所得决明子提取物，与硅胶以1∶1质量比拌样，洗脱剂氯仿-甲醇，干法上样，洗脱3～5倍柱体积后，挖出上样层，继续用甲醇洗脱硅胶柱，通过TLC追踪检测，直至无红链霉素-6-O-β-龙胆二糖苷。回收洗脱液，得到红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷粗提物。

(3)将步骤(2)红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷粗提物用体积浓度30％～80％甲醇水溶液溶解，配置成浓度为50～150mg/mL的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；采用柱长10～50cm、直径1～10cm的高效液 相制备色谱柱进行分离，六通阀或泵进样，进样体积为1～50mL，以体积浓度为40％～70％的甲醇-水为洗脱体系，流速控制在10～400mL/min，在线紫外检测，收集含有红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的洗脱液，减压浓缩干燥得黄色粉末I；

(4)黄色粉末I以体积浓度为35％～60％甲醇水溶液的洗脱体系进行第二次高效液相制备，其他条件同步骤(3)，收集纯度大于98％的含有红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的馏分；将上述馏分直接干燥即可得到纯度大于98％的红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷对照品，其为黄色粉末。

步骤(1)所述的提取溶剂为甲醇，乙醇，甲醇水溶液或乙醇水溶液。