[发明专利]一种通用型总RNA提取试剂盒及方法

说明书

本发明属于分子生物学领域，主要涉及到一种简单高效通用型总RNA提取试剂盒方法及。此试剂盒适用于从植物、动物、微生物、血液等多数生物样本以及植物根、茎、叶、花、果实不同组织部位提取高纯度、高完整性、高产量的总RNA，具有快速、方便、高效、通用等诸多优点，并且因为是薄型吸附柱而能够简便地最大限度的去除RNA提取过程中存在的色素油脂等杂质。提取的总RNA可以直接用于反转录及其他下游的分子生物学实验操作。

技术领域

本发明专利属于分子生物学领域。涉及一种简单高效的通用型总RNA提取试剂盒及方法。此试剂盒及方法适用于从植物、动物、微生物、血液等多数生物样本以及植物根、茎、叶、花、果实不同组织部位提取高纯度、高完整性、高产量的总RNA，并且提取的总RNA可以直接用于反转录及其他下游的分子生物学实验操作。

背景技术

随着转录组学、蛋白组学、代谢组学等组学的不断涌现，生物学研究已经跨入后基因组时代。转录组学作为一个率先发展起来的技术开始在生物学前沿研究中得到了广泛的应用。转录组学(transcriptomics)，是一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。简而言之，转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。转录组即一个活细胞所能转录出来的所有RNA的总和，是研究细胞表型和功能的一个重要手段。从生物材料中获得高质量的RNA不仅是转录组学研究的前提，也是后续RT-PCR、Northern杂交、cDNA文库构建等分子生物学研究的基础。目前，提取总RNA的方法有Trizol提取法、苯酚法、异硫氰酸胍法和CTAB法。但是由于RNA酶的广泛存在和难以灭活的顽固本性，使得RNA的抽提纯化和后续工作特别困难。虽然Trizol试剂和各类RNA抽提纯化试剂盒的广泛应用使得RNA抽提和纯化不再特别困难，但是这些提取方法普遍存在提取耗时、提取纯度不高、提取产量低或提取失败等各种问题。到目前为止，涉及RNA提取的工作仍然是分子生物学研究中最难以克服的难题。其中，植物材料总RNA的提取更是一个有待解决的分子生物学上的难题。这是因为植物材料尤其是植物的果实中存在大量的多酚和多糖化合物，它们和植物中的RNA结合形成一种复合物，从而严重影响到RNA的提取质量和产量。曾有报道指出有些RNA的提取方法可运用于富含多酚和多糖的材料，包括使用PVP和乙醇沉淀，盐酸胍，异丙醇等。但是，我们用这些方法在提取植物果实的RNA时，仍不能得到满意的结果。因此迫切需要一种简便、高效、经济且通用性较好的适用于总RNA的提取方法。我们通过多次实验，最终研制出酚-异硫氰酸胍结合硅基质柱的方法的试剂盒及方法，使用本试剂盒及方法不仅成功地从植物各种组织包括果实中提取到了高质量的总RNA，而且还可以从抗凝全血等多种材料中提取高纯度高质量的总RNA。提取的总RNA经过检测显示，完整性和纯度可以满足进一步RT-PCR的实验要求以及相关的下游分子生物学实验要求。

发明内容

本发明专利目的之一是提供一种应用于植物总RNA提取的试剂盒及方法；

本发明专利目的之二是提供一种应用于富含多糖多酚等杂质的植物总RNA提取试剂盒及方法；

本发明专利目的之三是提供一种应用于植物根、茎、叶、花、果实不同部位的总RNA提取试剂盒及方法；

本发明专利目的之四是提供一种应用于动物组织总RNA提取试剂盒及方法；

本发明专利目的之五是提供一种应用于微生物(主要包括酵母菌和细菌)总RNA提取试剂盒及方法；

本发明专利目的之六是提供一种应用于抗凝全血总RNA提取试剂盒及方法；

本发明专利的上述目的是通过以下技术方案来实现的：