[发明专利]一种检测血清中弓形虫IgM抗体纳米金免疫层析试纸

权利要求书

1.一种检测血清中弓形虫IgM抗体纳米金免疫层析试纸，其特征在于，所述纳米金免疫层析试纸由样品吸收垫、纳米金释放垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板组成；样品吸收垫上包被有弓形虫P22抗原；纳米金释放垫上包被有纯化的弓形虫纳米金标记的多克隆抗体；硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述检测线包被有弓形虫纳米金标记的多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗兔IgM抗体。

2.如权利要求1所述的一种检测血清中弓形虫IgM抗体纳米金免疫层析试纸，其特征在于，所述的多克隆抗体的制备方法为：将花生油和羊毛脂按1:3的比例混合用超声法使之混合均匀，再进行灭菌处理，将其与弓形虫P22抗原以1:1的比例混合，振荡均匀成乳状，使其完全乳化，检验合格后用注射器抽取600μg剂量在家兔的皮下注射，15天后进行加强免疫，免疫剂量为200μg，再15天后，取血ELISA检测抗体效价，达到要求后收集血液在37℃恒温箱中放置35分钟，再在4℃下放置过夜，将血液转移至离心管中，4℃下离心10分钟，收集上清液即为抗血清，纯化抗体，即得到所述的多克隆抗体。

3.如权利要求1所述的一种检测血清中弓形虫IgM抗体纳米金免疫层析试纸，其特征在于，所述的纳米金标记多克隆抗体的制备方法为：配制质量浓度为0.01-0.05％的氯金酸溶液200mL，再加入质量浓度为2-3％的柠檬酸钠溶液15mL，边加热边均匀搅拌，再加入质量浓度为2.5％的分散剂聚乙烯吡咯烷酮，调节pH值到7.0-8.2，得到纳米金溶液；取弓形虫多克隆抗体40μg加入制备好的纳米金溶液中，通过磁力震荡搅拌使其得以标记，再加入质量浓度为4％的胎牛血清，其加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，所得混合溶液离心处理，得到纯化的弓形虫纳米金标记的多克隆抗体。

4.如权利要求1所述的一种检测血清中弓形虫IgM抗体纳米金免疫层析试纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的包被方法为：在硝酸纤维素膜上依次包被检测线和质控线，检测线包被的是弓形虫纳米金标记的多克隆抗体，质控线包被的是羊抗兔IgM抗体。

5.如权利要求1所述的一种检测血清中弓形虫IgM抗体纳米金免疫层析试纸的制备方法为：

步骤一：纳米金释放垫制备方法：

(1)将花生油和羊毛脂按1:3的比例混合用超声法使之混合均匀，再进行灭菌处理，将其与弓形虫P22抗原以1:1的比例混合，振荡均匀成乳状，使其完全乳化，检验合格后用注射器抽取600μg剂量在家兔的皮下注射，15天后进行加强免疫，免疫剂量为200μg，再15天后，取血ELISA检测抗体效价，达到要求后收集血液在37℃恒温箱中放置35分钟，再在4℃下放置过夜，将血液转移至离心管中，4℃下离心10分钟，收集上清液即为抗血清，纯化抗体，即得到所述的多克隆抗体；

(2)配制质量浓度为0.01-0.05％的氯金酸溶液200mL，再加入质量浓度为2-3％的柠檬酸钠溶液15mL，边加热边均匀搅拌，再加入质量浓度为2.5％的分散剂聚乙烯吡咯烷酮，调节pH值到7.0-8.2，得到纳米金溶液；取(1)中制备的弓形虫多克隆抗体40μg加入制备好的纳米金溶液中，通过磁力震荡搅拌使其得以标记，再加入质量浓度为4％的胎牛血清，其加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，所得混合溶液离心处理，得到纯化的弓形虫纳米金标记的多克隆抗体；

(3)将(2)中制备好的纳米金包被纯化的弓形虫纳米金标记的多克隆抗体均匀喷涂于聚酯膜上，冷冻干燥，即为纳米金释放垫；

步骤二：硝酸纤维素膜的包被方法：在硝酸纤维素膜上依次包被检测线和质控线，检测线包被的是弓形虫纳米金标记的多克隆抗体，质控线包被的是羊抗兔IgM抗体；

步骤三：样品吸收垫的制备方法：将弓形虫P22抗原60μg用2倍量的PBS溶解后包被在玻璃纤维膜上，即为所需样品吸收垫；

步骤四：试纸制备：将样品吸收垫、纳米金释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次相互叠加粘贴在底板上，叠加厚度在3-4mm，然后将试纸包封储存。