[发明专利]用于诊断结核分枝杆菌感染的分子标志物、引物组及应用

说明书

本发明供用于诊断结核分枝杆菌感染的新型分子标志物，分子标志物选自序列如SEQ ID NO.1～28所示的RNA中的一种或两种以上的组合；或者，选自与SEQ ID NO.1～28所示的任何其中一种RNA的片段具有相同序列或者＞50％相同序列的RNA；或者是与SEQ ID NO.1～28所示的任何其中一种RNA全长或片段具有＞50％的RNA序列相似性的人工合成、拼接、重组或克隆的RNA。本发明还提供上述分子标注物的特异性引物组，及提供上述分子标志物及引物组的应用。序列如SEQ ID NO.1～28所示的RNA可以作为判别是否被结核分枝杆菌感染的特异分子标志物或诊断靶点，可应用于制备用于诊断结核分枝杆菌感染的制剂中。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及用于诊断结核分枝杆菌感染的分子标志物及在结核分枝杆菌感染诊断中的应用。

背景技术

结核病(Tuberculosis,TB)是因结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一种“高感染率”、“高致病率”与“高致死率”烈性传染病。2015年世界卫生组织(WHO)发布的世界结核年报显示，结核病的年致死人数达到150万，已经超过因艾滋病或HIV感染所致死人数。中国是全球结核分枝杆菌携带人数最多、活动性结核病人最多以及结核耐药疫情最为严重的国家之一。所以，迅速控制结核疫情蔓延迫在眉睫。

早期、快速、便捷诊断结核是控制结核病的一个关键环节。只有早期、快速、便捷、准确诊断出是否被结核分枝杆菌感染，才能为临床治疗用药提供依据，才能为结核病控制部门采取及时、快速的公共卫生防控措施提供决策依据。

目前的结核分枝杆菌感染诊断技术主要包括有细菌学诊断与免疫学诊断。其中细菌学诊断包括结核分枝杆菌痰涂片抗酸染色、结核分枝杆菌培养、及痰标本的结核分枝杆菌特异核酸PCR检测等。但是，基于痰标本抗酸染色、培养、PCR的结核分枝杆菌细菌学诊断技术严重依赖于结核病人排出的痰液里面必须有结核分枝杆菌。然而，有＞50％的结核感染病人因不排痰或者排的痰里面不含结核分枝杆菌所以无法在痰液里面检测到结核分枝杆菌，而且结核分枝杆菌不仅培养周期非常漫长，往往需要3～6周，而且培养要求高。所以，结核分枝杆菌感染的细菌学诊断技术具有很大的局限性，存在诊断效率低、周期长、灵敏度低、技术复杂等缺陷，而且无法适用于临床约＞50％的痰标本结核分枝杆菌阴性结核病人的诊断。

结核的免疫学诊断技术主要包括结核菌素皮试(TST)与IFN-γ释放的ELISA或者ELISPOT检测。结核菌素皮试(TST)的主要优点是价格相对低廉、适宜大规模结核感染人群的结核筛查。但是，结核菌素皮试(TST)的诊断缺乏结核分枝杆菌特异性，而且结核菌素皮试(TST)的结果非常容易受到机体免疫力与生理状态的非特异性干扰。所以结核菌素皮试(TST)存在诊断特异性差、灵敏度低的致命缺点。基于结核分枝杆菌特异的IFN-γ释放的ELISA或者ELISPOT检测的结核免疫学诊断技术相比结核菌素皮试(TST)诊断技术有更高的特异性。但是，基于结核特异的IFN-γ释放ELISA或者ELISPOT检测的结核免疫学诊断技术需要专业的细胞培养实验室对受试者的细胞进行培养，细胞培养实验周期长，ELISPOT的数据读出需要专业、昂贵的ELISPOT斑点读出仪器，总体诊断价格昂贵，不适用于基层的结核早期、快速诊断，也不适合婴幼儿的结核诊断。而且，大量的结核病人处于免疫抑制或紊乱状态，IFN-γ的表达受到抑制或者处于紊乱的状态，所以，基于结核特异的IFN-γ释放的结核诊断技术存在技术上天然的缺陷。

因此，发现新的结核特异的诊断生物标记物，开发灵敏、方便、快捷、特异性高并且廉价的结核诊断新技术就成为了控制结核疫情蔓延的重要工作。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明第一方面提供用于诊断结核分枝杆菌感染的新型分子标志物，所述分子标志物选自序列如SEQ ID NO.1～28所示的RNA中的一种或两种以上的组合。